血管生长抑制素和CD34在胆管癌组织中的表达及其临床意义的研究目的原发肿瘤的生长、生存及转移均依赖于其病灶局部血管的新生以提供营养，这个过程叫做血管生成。近几年来对实体肿瘤血管形成的研究已取得较大进展。在肿瘤血管形成的调节方面，已发现许多血管形成的生长因子和抑制因子。因此，肿瘤的血管系统已成为一个有希望的、新的抗肿瘤治疗靶点。人们已致力于开发和研究能破坏或抑制血管生成、有效地阻止肿瘤的生长和转移的药物，这类药物称为肿瘤血管生成抑制剂，如血管生长抑制因子(angiostatin，AS)。CD34是内皮细胞标记物之一，参与血管生成，可作为MVD定量的指标，而且具有较高的特异性和敏感性，是评估新生血管的金标准，并与肿瘤转移有关。本研究采用原位杂交法检测胆管癌组织中AS的表达以及采用免疫组化法检测CD34的MVD值，并分析其与胆管癌临床病理参数间的关系，以探讨AS和CD34与胆管癌发生、发展及预后的相关性。材料和方法1．实验对象：收集中国医科大学附属第二医院外科1999-2006年外科手术治疗的胆管癌组织标本45例，病理证实均为胆管癌。其中男18例，女27例，年龄18-76岁。根据WHO病理分类标准为高、中分化腺癌者31例，低分化腺癌14例。肿瘤部位：胆总管中下段27例、肝门部18例。经肉眼或病理所见有浸润转移者34例，无转移者11例。所有患者术前均未接受化疗和放疗。另取良性胆管标本11例作为对照。2．实验方法：本研究采用原位杂交法检测胆管癌组织中AS的表达。采用人AS原位杂交检测试剂盒进行检测。针对人AS的cDNA探针序列如下：1：5’--GCACT TGGCT GTTGG TTGTA TGGCA C；2：5’--CGTCA GGATT GCGGCAGTAG TTTTC AT；3：5’--CTGCT CTTTG CTGTG CTACT GGAAT GAC细胞浆染成棕黄色为阳性，结果用Meta Norph Imaging System软件处理，按图象灰度结果分为五个等级：无染色，灰度值不少于130，为阴性(-)；轻微染色，灰度值在125～130之间，为弱阳性(±)；染色较浅，灰度值在115～125之间，为阳性(+)；染色较深，灰度值在105～115之间，为较强阳性(++)：染色深，灰度值不大于105，为强阳性(+++)。采用免疫组化法检测CD34的MVD值，并分析其与胆管癌临床病理参数间的关系。结果1．AS在不同胆管组织中的表达在胆管癌组和良性组织中均可见AS阳性染色，且表达主要定位于肿瘤细胞胞浆中，呈弥漫性或散在分布的棕黄色颗粒。AS在胆管癌组织内的表达呈明显的异质性，大部分癌组织边缘区细胞染色强于中心区，部分癌组织坏死周边区可见强阳性染色出现，内皮细胞及血管壁可见均匀的AS阳性染色。良性组织AS阳性表达率18.2％(2／11)，胆管癌组织阳性表达率60.0％(27／45)，二者相比，差异有统计学意义(X~2=6.19，P＜0.05)(见表1)。2．胆管癌组织中AS的表达与临床病理参数的关系AS的表达与性别、年龄、肿瘤部位及分化程度等无相关性(P＞0.05)；而与肿瘤有无淋巴结转移有非常显著性相关(P＜0.05)。3．MVD在不同胆管组织中的表达CD34抗体特异表达于血管内皮细胞胞质中。MVD染色阳性细胞为血管内皮细胞染成棕黄色或褐色，肿瘤内血管分布呈现异质性，在肿瘤组织浸润前缘密度较高，而在硬化坏死区则较稀疏。11例非肿瘤性胆管组织和45例胆管癌组织的MVD表达率分别为26.80±5.14，31.78±4.41，差异具有显著意义(t=4.34，P＜0.05)(见表3)。4．MVD在胆管癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系MVD在淋巴结转移组和无转移组分别为41.23±9.76，30.93±6.12，差异有显著意义(P＜0.05)。MVD在肿瘤的高中分化与低分化的表达分别为32.62±7.96和39.22±7.75，差异具有显著意义(P＜0.01)。同时MVD的表达与肿瘤部位(胆总管下段为33.42±8.99、肝门部为37.79±10.15)也有显著性相关(P＜0.01)。而与患者患病的年龄和性别无关(P＞0.05)。结论1．在国内首次进行胆管癌与血管抑素的相关性研究，本研究结果显示AS在胆管癌组织中呈高表达，而AS与年龄、性别及肿瘤的发生部位、分化程度无关，与有无淋巴结转移和肿瘤的有关；2．CD34抗体特异表达于血管内皮细胞胞质中，且在胆管癌组织中呈高表达，CD34与年龄、性别无关，而与肿瘤的分化程度、发生部位以及有无淋巴结转移有关；3．本研究结果提示，AS与CD34在胆管癌癌变中可能起协同作用。