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研究目的:
通过不同培养条件下人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)的培养,探索脂蛋白对细胞存活、TM、EPCR表达的影响。
研究方法:
1.从人脐带中提取HUVEC,进行体外培养。
2.在HUVEC培养液中加入不同浓度的LDL、OX-LDL、HDL,培养不同的时间。
3.用MTT法测定HUVEC的存活量。
4.取培养液用ELISA试剂盒测上清中的sTM、sEPCR;固定培养板上的细胞,用细胞ELISA法测定细胞膜上的TM、EPCR;提取 mRNA,RT-PCR后进行紫外荧光显像,以TM、EPCR与β-actin的mRNA比值进行半定量分析。
研究结果:
1.LDL和OX-LDL对HUVEC存活有抑制作用,作用24h,此抑制作用呈浓度依赖性。HDL对HUVEC存活无明显影响。
2.LDL和OX-LDL能使上清中sTM量增加,在25~75μg/ml范围内呈浓度依赖性;LDL能使细胞膜上TM量增加,在25~75μg/ml范围内呈浓度依赖性;OX-LDL能使细胞膜上TM减少,在50~100 μg/ml范围内呈浓度依赖性;HDL对上清中sTM和细胞膜上TM无明显影响。
3.LDL和OX-LDL能使上清中sEPCR减少,在25~100μg/ml范围内呈浓度依赖性,对细胞膜上EPCR无明显影响;HDL能使上清中sEPCR和细胞膜上EPCR增加,在25~100μg/ml范围内呈浓度依赖。
4.LDL、OX-LDL可能能上调HUVEC TM mRNA的表达,下调EPCR mRNA的表达;HDL可能对HUVEC TMmRNA表达无明显影响,可能能上调EPCR mRNA的表达,但均不明显。
结论:
1.LDL和OX-LDL对HUVEC的存活有一定程度的抑制作用,而 HDL对HUVEC的存活无明显影响。
2.LDL和OX-LDL能刺激HUVEC释放TM,LDL刺激细胞膜上TM表达,OX-LDL抑制细胞膜上TM表达;LDL和OX-LDL总体上对EPCR在细胞膜上表达和释放有抑制作用。HDL对TM在细胞膜上表达和释放无明显影响,能刺激EPCR的在细胞膜上表达和释放。
3.LDL、OX-LDL可能能上调HUVEC TM mRNA的表达,下调EPCR mRNA的表达;HDL可能对HUVEC TMmRNA表达无明显影响,可能能上调EPCR mRNA的表达,但均不明显;需进一步实验证实。