论文部分内容阅读
目的：通过采用肺缺血再灌注损伤(lung ischemic-reperfusion injury,LIRI)的动物模型,观察缺氧诱导因子-1a (HIF-1a)和血管内皮生长因子(VEGF)在肺缺血再灌注损伤中的意义,进一步揭示缺血再灌注损伤的发生机制,通过沐舒坦药物干预分析沐舒坦在肺缺血再灌注损伤中的作用。方法：阻断肺门60分钟,再灌注6小时建立大鼠肺缺血再灌注损伤动物模型。将50只Wistar雌性大鼠,随机分为五组,空白对照组(Control组)：不对动物作任何处理,无呼吸机辅助,直接麻醉后剖胸取肺组织标本,此组作为各组术前空白对照；缺血再灌注损伤组(IR组)：气管切开,呼吸机辅助,左侧开胸,游离左肺门,阻断60min后开放阻断钳,关胸,自开放肺门阻断钳开始,6小时后处死动物,取肺标本；缺血再灌注-手术对照组(IR-Sham组)：气管切开,呼吸机辅助,左侧开胸,游离左肺门,不阻断,关胸,自关胸开始,6小时后处死动物,取肺标本；纯缺血组(I组)：气管切开,呼吸机辅助,左侧开胸,游离左肺门,阻断60min后,不开放阻断钳,直接取肺标本；单纯缺血-手术对照组(Ⅰ-Sham组)：气管切开,呼吸机辅助,左侧开胸,游离左肺门,不阻断,取肺标本。各组设计纳入10只大鼠,如有试验期间死亡,则继续补足至10只。实验结束时,摘取肺组织,测肺组织湿/干重比值(W/D),制成匀浆测肺组织IL-1β, TNF-α,采用组织病理学、免疫组织化学染色技术与图像分析技术,观察肺组织病理学改变,VEGF及HIF-1α的表达。之后再取雌性Wistar大鼠40只评价沐舒坦在肺缺血再灌注损伤中的保护作用。分组如下：(1)空白对照组(Control组)：不对动物作任何处理,无呼吸机辅助,直接麻醉后剖胸取肺组织标本,此组作为各组术前空白对照(2)缺血再灌注-手术对照组(IR-Sham组)：气管切开,呼吸机辅助,左侧开胸,游离左肺门,不阻断,关胸,自关胸开始,经股静脉以微量注射泵持续静脉输入生理盐水(5ml/kg/h),6小时后处死动物,取肺标本(3)缺血再灌注损伤组(IR组)：气管切开,呼吸机辅助,左侧开胸,游离左肺门,阻断60min后开放阻断钳,关胸,自开放肺门阻断钳开始,经股静脉以微量注射泵持续静脉输入生理盐水(5ml/kg/h),6小时后处死动物,取肺标本(4)沐舒坦干预组(Ambroxol组)：气管切开,呼吸机辅助,左侧开胸,游离左肺门，阻断60min后开放阻断钳,关胸,自开放肺门阻断钳开始,经股静脉以微量注射泵持续静脉输入沐舒坦溶液(5ml/kg/h),6小时后处死动物,取肺标本。各组设计纳入10只大鼠,如有试验期间死亡,则继续补足至10只。实验结束时,摘取肺组织,测肺组织湿／干重比值(W/D),制成匀浆测肺组织IL-1β、TNF-α, MPO。采用组织病理学、免疫组织化学染色技术与图像分析技术,观察肺组织病理学改变,VEGF及HIF-1α的表达。结果：各组肺组织湿／干比重：Control组、IR-Sham、Ⅰ组、Ⅰ-Sham组与IR组组间数据差异具有统计学差异(P<0.05)；肺组织IL-1β、TNF-α含量,IR组均明显高于Control组、IR-Sham、Ⅰ组、Ⅰ-Sham组(P<0.05),但I组与IR组差异无统计学意义。病理切片观察到IR组肺组织充血水肿及炎细胞浸润较其他4组更加明显。各组肺组织HIF-1a蛋白的表达水平组间总体数据差异有统计学意义(P<0.05),组间两两比较发现,IR组与Ⅰ-Sham组、IR-Sham、Ⅰ组差异无统计学意义。各组肺组织VEGF的相对表达水平组间总体差异有统计学意义(P<0.05),组间比较发现,IR组分别于I组、Ⅰ-Sham组之间差异有统计学意义(P<0.05),但与Control组、IR-Sham组之间差异无统计学意义。(P>0.05)。缺血再灌注损伤组大鼠肺组织HIF-1a、VEGF基因表达的相关分析：经Pearson相关性检验,缺血再灌注组大鼠肺组织HIF-1a、VEGF表达水平明显相关,提示LIRI期间2种因子表达之间存在相互影响或相互调控的可能性。沐舒坦干预组测得的大剂量沐舒坦干预后,IL-1β、TNF-α的含量以及MPO活性明显低于无药物干预的缺血再灌注损伤组。同时肺组织的W/D显著减低,Pa02明显升高。结合光镜下病理发现沐舒坦干预后,肺泡间隔水肿,肺内出血等较再灌注损伤组明显减轻。结论：HIF-1α、VEGF均参与了LIRI;沐舒坦对于肺缺血再灌注损伤有保护作用。