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目的:奶牛乳腺炎是奶牛养殖业常见的乳腺疾病,严重影响了奶牛的健康与生产性能,甚至对人类健康也有所影响,我国奶牛业奶牛乳腺炎的发病率一直居高不下,对社会经济造成了巨大的损害。金黄色葡萄球菌是奶牛乳腺炎的主要病原菌之一。TGF-β1是一种多功能的细胞因子,对调节机体免疫及细胞增殖发挥重要的作用。本课题组前期研究发现乳腺炎多发的奶牛群TGF-β1水平较高,并且TGF-β1会增加奶牛乳腺上皮细胞对金黄色葡萄球菌的易感性。然而,在TGF-β1作用下,奶牛乳腺上皮细胞是否会通过细胞间通讯影响免疫细胞的功能却仍然是未知的。因此本研究假设在TGF-β1作用下,奶牛乳腺上皮细胞来源的外泌体会影响牛巨噬细胞的功能,旨在探讨在TGF-β1作用下,奶牛乳腺上皮细胞来源的外泌体影响牛巨噬细胞的功能的机制。方法:在本研究中我们通过超速离心法和试剂盒法提取了正常牛乳腺上皮细胞(MAC-T)来源的外泌体(un-exo)和TGF-β1作用下牛乳腺上皮细胞来源的外泌体(t-exo),分别作用于牛巨噬细胞,通过MTT实验和细胞流式实验检测了两种外泌体体对牛巨噬细胞增殖和细胞周期的影响,采用q RT-PCR和Western blot实验找出了相关蛋白信号通路;通过MTT实验和细胞流式实验检测了两种外泌体体对牛巨噬细胞凋亡和迁移的影响;最后采用q RT-PCR检测了TGF-β1作用下,牛乳腺上皮细胞来源的外泌体对牛巨噬细胞炎性细胞因子分泌的影响。结果:(1)TGF-β1作用下牛乳腺上皮细胞来源外泌体通过激活p38MAPK信号通路减慢了牛巨噬细胞的细胞周期进程从而抑制了牛巨噬细胞的增殖能力。(2)牛乳腺上皮细胞来源的外泌体可以诱导牛巨噬细胞凋亡,这一过程不依赖FADD信号通路,且TGF-β1作用对于牛乳腺上皮细胞来源的外泌体诱导牛巨噬细胞凋亡无显著影响。(3)牛乳腺上皮细胞来源外泌体可以增加牛巨噬细胞的迁移能力,TGF-β1作用下,牛乳腺上皮细胞来源外泌体促进牛巨噬细胞的迁移的能力减弱。(4)TGF-β1作用下,牛乳腺上皮细胞来源外泌体显著上调牛巨噬细胞抑炎因子IL-10的分泌,下调牛巨噬细胞促炎因子IL-12的分泌。结论:TGF-β1作用下,牛乳腺上皮细胞来源外泌体能够抑制巨噬细胞活性,可能是TGF-β1水平较高奶牛群易发乳腺炎的原因之一,这为奶牛乳腺炎的预防和治疗提供了新的思路。抑制p38MAPK信号通路可作为恢复巨噬细胞活性的靶点,抑制TGF-β1水平较高奶牛乳腺中外泌体分泌也可能是奶牛乳腺炎预防方法之一。