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目的:高胆固醇血症是心血管疾病的主要危险因素,他汀类药物不仅有效降低血中低密度脂蛋白胆固醇水平,而且显著减少心血管疾病的发病率和死亡率,被广泛用于心血管疾病的一、二级预防中。阿托伐他汀是其中应用最多的一种他汀类药物。肝损伤是他汀最常见的不良反应之一,但其发病的危险因素和机制尚不完全清楚。炎症应激是药物诱导性肝损伤的易感因素,然而并不清楚它是否可增加他汀诱导肝损伤的敏感性。此外,药物诱导性肝损伤的发生依赖于药物对肝脏的损伤与肝脏适应性自我保护之间的失衡。有报道许多药物包括他汀可诱导肝细胞产生过多的活性氧(ROS),引起氧化应激损伤。另一方面,核因子E2相关因子2(Nrf2,调节大多数抗氧化酶基因表达的主要转录因子)的激活可保护肝脏免受药物诱导的损伤,这两者的失衡是否可解释他汀诱导的肝损伤目前也不清楚。本课题旨在研究炎症状态下阿托伐他汀对Apo E-/-小鼠肝脏的影响,并探讨其可能的分子机制。方法:西方饮食喂养雄性Apo E-/-小鼠建立高胆固醇血症模型,酪蛋白隔日皮下注射小鼠建立慢性炎症模型。ApoE-/-小鼠被随机分为4组:对照组(0.9%生理盐水0.5ml隔日皮下注射);阿托伐他汀组(0.9%生理盐水0.5ml隔日皮下注射+阿托伐他汀10mg/kg/d口服);酪蛋白注射组(10%酪蛋白0.5ml隔日皮下注射);酪蛋白注射联合阿托伐他汀治疗组(10%酪蛋白0.5ml隔日皮下注射+阿托伐他汀10mg/kg/d口服),建模时间共8周。第一部分:酶联免疫吸附试验(elisa)检测血清炎症因子(il6和tnfα)和游离脂肪酸(ffa)水平。检测小鼠血清总胆固醇(tc)、低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)、甘油三酯(tg)、谷丙转氨酶(alt)和谷草转氨酶(ast)的水平。苏木精-伊红(he)和油红o染色了解肝脏脂肪变程度。酶偶联比色法检测肝组织甘油三酯(tg)含量;elisa检测肝脏游离脂肪酸(ffa)含量。rt-pcr和westernblot分别检测小鼠肝组织脂肪酸合酶(fas)、乙酰辅酶a羧化酶(acc)和固醇调节元件结合蛋白1(srebp1)的基因和蛋白表达。肝组织f4/80免疫组化染色了解肝脏巨噬细胞浸润情况。rt-pcr和westernblot分别检测小鼠肝组织白介素1β(il-1β)、肿瘤坏死因子α(tnfα)和单核细胞趋化蛋白1(mcp1)的基因和蛋白表达。天狼猩红染色了解肝组织胶原沉积情况。rt-pcr和westernblot分别检测小鼠肝组织α平滑肌肌动蛋白(αsma)、iv型胶原蛋白(coliv)和转化生长因子β(tgfβ)的基因和蛋白表达。第二部分:肝组织新鲜冰冻切片dhe染色了解超氧阴离子(o2-)的含量。比色法检测小鼠肝组织过氧化氢(h2o2)和丙二醛(mda)的含量。肝组织nrf2免疫组化染色了解nrf2在肝细胞胞浆和胞核的分布和表达情况,westernblot进一步检测肝组织胞浆和胞核nrf2的蛋白表达。rt-pcr检测nrf2下游靶基因血红素加氧酶-1(ho-1)、醌氧化还原酶1(nqo1)和超氧化物歧化酶2(sod2)的基因表达。酶比色法检测小鼠肝组织过氧化氢酶(cat)和总超氧化物歧化酶(sod)的活性。结果:第一部分:酪蛋白皮下注射的小鼠血清il6和tnfα水平明显高于对照组(p<0.05),提示炎症模型成功建立。无论在非炎症还是炎症状态下,阿托伐他汀均明显降低小鼠血清tc和ldl-c水平(p<0.05),但对血清tg和ffa无明显影响。炎症状态下,阿托伐他汀明显升高血清alt和ast水平(p<0.05),加重肝脏脂质沉积,明显增加肝脏tg和ffa含量(p<0.05),并上调fas、acc和srebp1的基因、蛋白表达(p<0.05);同时增加肝组织巨噬细胞浸润,上调il1β、tnfα和mcp1的基因、蛋白表达(p<0.05);此外,阿托伐他汀还促进肝脏胶原沉积,增加αsma、coliv和tgfβ的基因、蛋白表达(p<0.05)。但在非炎症状态下,阿托伐他汀对血清alt和ast水平无明显影响,且不加重肝脏脂肪变、炎症和纤维化程度。第二部分:非炎症状态下,阿托伐他汀治疗的小鼠肝脏o2-、h2o2和mda的含量较对照组无明显变化,但肝细胞胞浆、胞核nrf2的蛋白表达及其下游靶基因的mrna表达均明显增加(p<0.05),肝脏cat、sod的活性也明显增强(p<0.05)。与之相反的是,炎症状态下阿托伐他汀治疗的小鼠肝脏o2-、h2o2和mda的含量明显增加(p<0.05),但肝脏nrf2的蛋白表达,nrf2下游靶基因mrna的表达以及cat、sod的活性均无明显变化。结论:1、非炎症状态下,阿托伐他汀对apoe-/-小鼠血清转氨酶和肝脏病理无明显影响,但在炎症状态下,阿托伐他汀明显升高小鼠血清转氨酶,加重肝脏脂肪变、炎症和纤维化程度;2、非炎症状态下,阿托伐他汀治疗的小鼠肝脏活性氧无明显增加,且无明显氧化应激损伤,可能与Nrf2介导的抗氧化能力增强有关。但是炎症状态下,这一适应性保护反应无法被激活,阿托伐他汀则诱导明显的肝脏氧化应激损伤。