肝炎肝郁脾虚证动物模型综合药效评价指 标的建立

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目的:通过皮下注射四氯化碳、慢性束缚尝试建立肝郁脾虚证模型,并用经典治疗药逍遥丸化裁方对该模型进行干预,初步形成慢性肝炎肝郁脾虚证的建立方法,形成综合药效评价指标。方法:成年雄性大鼠32只,体重250g-300g。购入大鼠后适应性饲养一周后,分为A(空白组),B(模型组),C(逍遥丸化裁方组)三组。空白组8只其余每组12只,除A组大鼠外,其余24只大鼠均按0.5ml/100g体重皮下注射10%CCL4豆油溶液,首次剂量加倍,每周注射2次,共四周。第四周从模型组中任选两只大鼠测ALT、AST来确定肝损伤的程度。开始造模一周后,以慢性束缚方法制作慢性应激大鼠模型,将B、C组大鼠束缚于束缚筒内,放入饲养箱中,每日3h,早8点到11点,连续21d。A组不予束缚,但于相同时间点禁食,放置于各自饲养箱中3h/d,连续21d。C组大鼠在实验开始1周后,每次开始束缚前30mmin给各组大鼠灌胃给药,1次/d,共用3周。(以人用药量的30倍作为大鼠给药的逍遥丸化裁方组,灌胃容积为20mL/kg体重)。A组则分别灌服同等换算体积的蒸馏水。观察实验动物的情绪行为、日饮用量、大便溏薄观察、自主活动能力。给药后每周灌服D-木糖接取尿液检测尿液中D-木糖排泄率。检测血清中5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)水平,丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平,血浆生长抑素(SS)、胃动素(MTL)、血管活性肠肽(VIP)的水平,总胆红素(TBILI)、直接胆红素(DBILI)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)的变化,白介素-2、6、8的水平。观察肝脏病理变化。所有指标进行组间t检验统计学处理。结果:行为学指标:实验动物出现便溏、饮食饮水量减少、暴躁易怒、体重降低等症状。逍遥丸化裁方组与模型组比较,肝脏、脾脏、肾上腺指数降低。生化指标显示与模型组比较:1.空白组、逍遥丸化裁方组尿液中D-木糖的含量低于模型组。2.5-HT含量升高(P<0.05),DA明显升高(P<0.01),NE含量又降低趋势。3.血清中ALT和AST的水平明显低于模型组(P<0.05)。4.ALB明显升高(P<0.001)、DBLI有降低趋势、TP明显升高(P<0.05),TBILl各组间无明显差异。5.MTL明显升高(P<0.05)、VIP显著升高(P<0.001)、SS升高(P<0.05)。6.IL-2降低(P<0.05)、IL-6降低、IL-8降低。7.空白组肝组织结构正常,模型组肝小叶结构不清,可见明显的片状坏死,伴有炎症细胞浸润。逍遥丸组肝小叶结构尚正常,可见明显的混浊肿胀气球样变或脂肪变性,散在点状坏死。结论:肝炎肝郁脾虚证动物模型综合药效评价指标的建立。
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