子宫内膜炎是影响奶牛生产的重要疾病之一,该病的有效防治至关重要。抗生素是目前普遍用于治疗该病的药物,但长期的使用会带来菌株耐药性和药物残留等问题。因此,需要开发新的预防性和治疗性药物来防控子宫内膜炎。本文研究了三株乳杆菌约氏乳杆菌（Lactobacillus johnsonii）、唾液乳杆菌（Lactobacillus salivarius）、魏斯氏乳杆菌（Lactobacillus weissella）对LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症反应的预防作用。首先,利用涂板计数法绘制三株乳杆菌的生长曲线,同时检测乳杆菌OD₆₀₀的变化。然后利用牛津杯法检测三株乳杆菌上清液对奶牛子宫内膜炎主要病原菌的抑制效果,结果表明三株乳杆菌的上清液对主要致病菌均有显著的抑制作用（P<0.05）。在此之后,采用1μg/mL的LPS分别处理奶牛子宫内膜上皮细胞0、3、6、9、12、24 h后,通过检测细胞LDH的释放量计算出细胞的死亡率,结果表明各个时间段的处理均未对细胞造成显著的损伤影响（P>0.05）。通过ELISA和荧光定量检测细胞因子IL-8和TNF-α的表达,结果表明1μg/mL的LPS只有在处理细胞3 h后细胞因子IL-8与TNF-α蛋白和mRNA的表达均显著上升（P<0.05）,以此成功建立体外炎症模型。将三株乳杆菌悬液稀释至10⁴、10⁵、10⁶ CFU/mL,LDH结果表明其对细胞无显著的损伤影响（P>0.05）。与奶牛子宫内膜上皮细胞共同培养3 h后,添加1μg/mL LPS处理3 h,检测趋化因子IL-8和促炎因子TNF-α蛋白和mRNA的分泌量。结果表明,在添加了10⁴ CFU/mL的约氏乳杆菌预处理3 h后,极显著降低了LPS处理后升高的IL-8和TNF-α表达量（P<0.01）。唾液乳杆菌、魏斯氏乳杆菌处理组和10⁵和10⁶ CFU/mL的约氏乳杆菌预处理的结果一致,IL-8和TNF-α蛋白和mRNA表达量均无显著变化（P>0.05）。为探究约氏乳杆菌对奶牛子宫内膜上皮细胞的抗炎机制,通过蛋白印记法检测NF-κB信号通路关键蛋白p-p65、p65、p-IκB-α、IκB-α表达量。结果表明,在添加了10⁴CFU/mL的约氏乳杆菌预处理3 h后,显著降低了p-p65/p65和p-IκB-α/IκB-α的比值（P<0.05）,证明约氏乳杆菌的抗炎作用是通过NF-κB信号通路完成的。综上所述,10⁴ CFU/mL约氏乳杆菌具有预防奶牛子宫内膜炎的作用,其表现出良好的抗炎作用,可作为微生态制剂开发的备选菌株。