恶性肿瘤严重地威胁着人类的健康，在各类疾病所致的死亡中，恶性肿瘤居第二位，并有进一步增高的趋势。肿瘤细胞可在多种途径、多个环节如肿瘤抗原表达缺陷、MHC分子表达异常、共刺激分子缺乏、肿瘤产生的免疫抑制因子、抗原递呈功能缺陷等逃避机体的免疫监视而在体内无限制的生长和发展。肿瘤细胞易侵袭、转移和复发的生物学特性也使治疗上十分棘手。传统的手术、放疗和化疗三大疗法已不能很好地适应当今肿瘤治疗的需要，探索新的高效的治疗方法势在必行。 肿瘤的免疫治疗为人类带来了新希望，它的主要目的是通过诱导和增强机体的主动特异性免疫反应，提高肿瘤对机体免疫效应的敏感性，从而达到消灭肿瘤的目的。 T淋巴细胞介导的细胞免疫在抗肿瘤免疫中起着十分关键的作用。超抗原SEA具有强大的T细胞激活能力，而B7．1分子可为T细胞活化提供第二信号，在抗原递呈和识别过程中具有十分重要的作用。我们将SEA和B7．1的编码基因在体外、体内分别或同时转染小鼠肝癌细胞，观察它们诱导的抗肝癌免疫排斥反应。 在研究中，我们首先探讨了阳离子脂质体DC-Chol介导基因转染的最优化条件，为后续的实验奠定基础。继之，利用脂质体介导的基因转染技术将SEA／B7．1基因分别导入小鼠肝癌细胞系Hepal-6中，用丝裂霉素灭活后制备瘤苗。该瘤苗对小鼠肝癌生长具有一定的抑制作用，小鼠生存期明显延长；用该瘤苗预先免疫小鼠可对随后的野生型Hepal-6细胞的攻击产生免疫保护作用，表现为小鼠成瘤率降低，成瘤潜伏期延长。无论是治疗组还是预防组，⁵¹Cr杀伤实验均显示出该瘤苗诱发了较强的CTL杀伤活性。最后，我们进行了体内实验，通过脂质体介导，观察了SEA／B7．1基因肿瘤局部转染对小鼠肝癌的治疗作用，结果显示转SEA组、转B7．1组及转SEA／B7．1基因组小鼠肿瘤生长缓慢，且有30％-40％小鼠肿瘤完全消退并能保持无瘤状态长期存活。双基因共转染 第四军医大学博士学位论文 组小鼠平均生存期更长，肿瘤缩小趋势更为显著、CTL杀伤活性更高， 提示SEA基因与B7＊基因共转染时具有一定的协同作用，其诱发小鼠 抗肝癌免疫的机理在于增强了肝癌细胞的免疫原性，激发了特异性的 CTL反应。而且SEA肿瘤局部转染可以使表达的毒素分子局限在表达 细胞所在的局部，最大限度地避免其全身使用所导致的毒副作用，同时 可避免T细胞耐受的发生，从而有望解决SEA实际应用中令人困扰的两 大难题。 SEA可直接引起高效免疫活性，B7人可增强淋巴细胞对靶细胞和抗 原递呈细胞的识别作用和杀伤作用，通过脂质体介导，将它们分别或同 时赋予肿瘤细胞，在肝癌细胞表面建立一个SEA／B7．1 分子免疫效应系 统，从而显著地提高了肝癌细胞诱导免疫排斥反应的能力，在小鼠肝癌 免疫基因治疗中取得了令人振奋的结果。 本研究展示了通过适当的基因转移载体把目的基因靶向导入肿瘤细 胞是一种非常有前途的方法，其安全、简便、快速、高效、可产生有效 的局部的和系统的免疫反应，为临床上原发性或转移性肿瘤的治疗开辟 了新途径。