基于黑麂粪便的个体识别和性别鉴定

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在野生动物生态学研究中,种群动态一直以来都是学者们欲解决的问题。属于基础研究的野生动物(兽类)个体识别,与野生动物种群动态研究有着密切的关系。DNA指纹拓宽了人们进行野生动物个体识别的思路。目前,利用DNA分子标记构建的各种DNA指纹系统较为常用,主要有:数目可变的串联重复序列(Variable number of tandem repeat, VNTR)、随机扩增多态性DNA (Random amplified polymorphic DNA, RAPD)、微卫星(Microsatellite)又称简单重复序列(Simple sequence repeat, SSR)或短串联重复序列(Short tandem repeat, STR)等。而在动物个体识别研究中,SSR指纹系统受到了学者们更为广泛的关注,且被成功用于多种野生动物的个体识别研究。自分子粪便学的兴起,野生动物粪便样本在动物种群生态学研究领域中得到了广泛应用。基于粪便样本利用微卫星DNA指纹技术在其他物种个体识别方面的成功应用,为进行野生黑麂个体识别研究奠定了坚实的基础。利用由8个微卫星位点构建的DNA指纹体系,从141份粪便样本中准确识别出31头野生黑麂个体。同时,CERVUS3.0和POPGENE1.21软件的遗传分析结果显示该识别体系具有较高的识别能力,8个微卫星位点的平均个体识别率(DP)为0.938,累计个体识别率(CDP)为0.999,其平均观测等位基因(Na)为8.875,平均有效等位基因(Ne)为6.375,平均期望杂合度(He)为0.829。该结果显示这-微卫星识别体系在种群大小估计中有着较为明朗的应用前景。另外,性比是描述种群结构的一个重要参数,性比的变化对种群的增长和动态有着明显的影响。在个体识别的基础上,本文首次利用SRY性别决定基因片段基于黑麂粪便试判断了这31头个体的性别,经多次重复扩增,结果有12头个体无目的条带,19头个体出现了大小为250bp左右的条带。即雌兽12头,雄兽19头。对随机挑选的8个SRY扩增产物进行了测序,与Genebank中黑麂SRY基因进行比对,平均相似度高达95%。由于研究中所识别的粪便样本来自于较小的样方,因此这一性别鉴定结果尚不可代表九龙山黑麂种群的性别结构,整个种群的性别结构现状有必要进行深入研究。本次研究是继探索黑麂粪便DNA提取技术之后的进一步深入,旨在为基于黑麂粪便的生态学研究提供直接证据,对今后的黑鹿研究工作及其它物种的相关研究具有一定的指导意义。
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