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目的:观察MUC1糖链和肽链表位在肾脏和膀胱肿瘤中的表达,筛选MUC1糖链表位的模拟肽,研究模拟表位肽疫苗诱导T739小鼠产生功能性免疫应答及预防和治疗膀胱癌的作用。 材料与方法:1)免疫组化二步法检测MUC1糖链和肽表位在肾癌及膀胱癌中的表达、分布及其与细胞类型、肿瘤分期分级的关系;2)筛选噬菌体随机12肽库,获得与识别MUC1糖链表位的单克隆抗体Ma695结合的模拟肽;流式细胞仪鉴定模拟肽的竞争抑制效应;分离小鼠脾脏单个核细胞,在GM-CSF和IL-4条件下培养获得树突状细胞,LPS促其成熟,FCM鉴定其纯度;负载模拟肽的成熟树突状细胞免疫T739小鼠后,用ELISA、ELISPOT等方法观察模拟肽诱导与原表位交叉反应的体液免疫应答和特异性细胞免疫应答;非放射性乳酸脱氢酶法检测体外细胞毒活性;3)利用脂质体介导的方法,在BST739中转入人MUC1全长cDNA,经G418筛选和克隆化培养,建立稳定表达MUC1的T739小鼠膀胱癌细胞亚系BST739-MUC1,PCR、RT-PCR、免疫组化、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、免疫印迹等鉴定MUC1基因和蛋白的表达及分布,观察转入人MUC1对肿瘤细胞黏附和体内外生长的影响;4)建立小鼠膀胱移行细胞癌预防和治疗模型,观察模拟表位肽疫苗的预防和治疗作用。 结果:1)MUC1在85.5%的肾脏肿瘤和100%的移行细胞癌中表达,阳性细胞数及分布模式与肿瘤分期分级相关。2)筛选噬菌体随机肽库获得MUC1糖链表位的模拟表位肽M1,能竞争抑制Ma695与MUC1+肿瘤细胞MCF7的结合。当细胞数为2×10~5、Ma695浓度为0.25μg/ml、M1肽浓度为100、200、400、800μg/ml时,抑制率分别为11%、26%、26%和34%;脾脏单个核细胞培养7天获得具有典型形态特征的树突状细胞,FCM显示其纯度为83.2%;负载M1肽的DC免疫小鼠后,诱导特异性CTL应答,ELISPOT结果表明,活化的特异性T细胞为脾脏淋巴细胞的116/10~6;同