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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的一种高度接触性传染病。该病主要引起妊娠母猪早产、流产、死胎、木乃伊胎等繁殖障碍以及各年龄段猪的呼吸道症状和高死亡率。PRRSV进入Marc-145细胞的过程是依赖受体进行的,目前已鉴定出在细胞上存在PRRSV的4个受体：硫酸乙酰肝素(heparin sulfate. HS)、唾液酸粘附素(sialoadhesin. Sn)、CD163分子和波形蛋白(Vimtin)。HS,Sn和CD163三者之间的关系大体为：HS主要作用是吸附PRRSV到PAM细胞上,Sn介导PRRSV的内吞。CD163和波形蛋白可能起协助Sn内吞、PRRSV脱衣壳和将病毒基因组RNA释放到细胞浆的作用。GP5是PRRSV的一个主要结构蛋白,在PRRSV感染和免疫过程中发挥重要的作用,因此,研究GP5的受体在各种细胞表面的分布对于控制PRRS的传播与发病有重要的意义。本实验采用哺乳动物细胞表达,流式细胞术检测结果；融合表达GFP和GP5蛋白,将检测基因和报告基因融合一体,这样就可以减少非特异性的吸附的问题,提高了检测方法的特异性。此外,采用哺乳动物真核表达方式,可以保留蛋白的天然结构和蛋白的生物活性。为了进一步研究和探寻PRRSV受体在细胞表面的分布,采用反转录-聚合酶链式反应RT-PCR的方法从接种了PRRSV的Marc-145细胞中扩增PRRSV的GP5基因,克隆到真核表达载体pEGFP-N1中。以pEGFP-N1-GP5为模板扩增GP5和GFP融合基因,再克隆到真核表达载体pcDNA3.1/V5-HisA中。将真核表达质粒pcDNA3.1-N1-GP5+GFP转染至HEK-293T细胞后,48h后可以直接通过倒置荧光显微镜检测GP5和GFP融合蛋白的表达。成功检测到融合蛋白的表达后,采用镍柱进行融合蛋白纯化,然后经过免疫印迹(Western-Blot)检测收集到的纯化蛋白。我们制备了猪肺巨噬细胞和Marc-145细胞,羊肺巨噬细胞、PK-15、Vero、MDBK,MCF-7及HEK-293T细胞的单细胞悬液,将纯化蛋白与上述细胞在4℃孵育1h后,进行流式细胞术检测阳性细胞。结果发现,在猪肺巨噬细胞和Marc-145细胞表面有PRRSVGP5受体的存在,而羊肺巨噬细胞、PK-15、Vero、MDBK、MCF-7及HEK-293T细胞表面未发现有GP5受体的存在。此外,通过血清阻断实验我们发现,高效价的猪血清可以阻断GP5蛋白与宿主细胞受体的结合,说明利用免疫猪血清有可能通过阻断PRRSV与受体的结合的方式,从而阻止病毒感染,进而达到防治PRRSV的目的。