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目的:(1)建立高低不同转移潜能的人骨肉瘤MG63细胞亚株M6,M8肺转移动物模型;(2)建立稳定表达TSLC1基因的人骨肉瘤细胞系;(3)探讨抑癌基因TSLC1对高转移潜能人骨肉瘤MG63细胞亚株侵袭和转移能力的影响。方法:(1)高低不同转移潜能的人骨肉瘤MG63细胞亚株M8、M6,制成2x10~7细胞悬液,通过尾静脉注射于裸鼠体内,4周起分批处死裸鼠,观察皮下成瘤时间,大小,肺转移出现时间,转移灶大小,以及瘤组织病理学和组化检测;(2)采用RT-PCR方法,以人正常肺组织中提取的总RNA为模板扩增TSLC1全长片段,克隆至pCI-neo真核表达载体。限制性酶双酶切及测序鉴定重组质粒pCI-TSLC1。脂质体转染的方法将表达载体稳定转染至高转移潜能人骨肉瘤MG63细胞亚株M8,经克隆化培养以及G418筛选,建立了16株稳定表达TSLC1蛋白的细胞系。对其中一株高表达细胞系M8T的细胞纯度、遗传稳定性、外源基因整合等生物学特性做了鉴定。(3)选用稳定高表达外源性抑癌基因TSLC1的人骨肉瘤MG63细胞亚株M8T细胞株为研究对象。转染空载体的细胞系M8P和未经处理的M8细胞株设为对照,MTT法检测M8T细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期变化,细胞凋亡的发生;Transwell检测M8T细胞株的体外侵袭和迁移能力;重悬1×10~7细胞皮下注射裸鼠,一周检测一次肿瘤生长情况。将2×10~7细胞悬液尾静脉注射裸鼠,观察骨肉瘤细胞体内肺转移情况。结果:MTT法检测细胞生长显示高转移潜能M8细胞增殖能力强于细胞亚株M6。尾静脉注射瘤细胞后,M8亚细胞株组裸鼠肺转移发生率为85%,其中60%肉眼即可观察到肺转移灶,转移灶数目平均为1-3/只,25%可以观察到镜下转移灶的形成;而低转移潜能的M6组,20只裸鼠中仅有5只出现肉眼可见的肺转移,有1只可见镜下肺转移灶,其转移率仅为30%。裸鼠发生肺转移的肺组织石蜡切片,免疫组化结果显示转移灶cyclinE1和Bcl-2表达阳性。另外,本研究成功构建了pCI-TSLC1真核表达载体并获得高表达TSLC1的稳定细胞系M8T。生物学性状研究结果表明该转基因细胞系纯度好,遗传性状稳定,抽提细胞RNA进行RT-PCR,扩增到与预期结果大小一致的DNA片段,说明TSLC1基因成功整合到细胞基因组中。稳定转染TSLC1基因的实验组M8T细胞与对照组细胞M8P和M8相比较,其细胞增殖能力下降,生长速度明显受到抑制;M8T细胞的生长周期出现了G0-G1期阻滞,细胞凋亡总数明显增加(P<0.01);体外侵袭和迁移能力变弱;M8T细胞与对照组细胞相比,裸鼠皮下成瘤形成时间晚,体积较小,体内肺转移形成时间晚,转移灶数目少。结论:(1)成功建立了高低不同转移潜能的骨肉瘤裸鼠肺转移模型。(2)成功建立了稳定表达TSLC1的骨肉瘤细胞系。该细胞系遗传性质稳定。(3)TSLC1基因可以明显抑制具有高转移潜能的骨肉瘤MG63细胞亚株的侵袭和转移能力。TSLC1基因有可能成为有效治疗骨肉瘤的候选基因。