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背景及目的：磷脂酰肌醇-3-激酶(P13K)及蛋白激酶B(AKT)所组成的信号通路与肿瘤增殖、凋亡、转移、侵袭及血管生成密切相关。作为该通路的核心,异常活化的AKT通过磷酸化其下游分子促进肿瘤恶性增殖及抵抗凋亡,并参与调节肿瘤对放化疗及靶向治疗的敏感性。特异性抑制AKT分子活化能有效阻断P13K/AKT信号通路,抑制肿瘤增殖,促进凋亡。研究显示在胃癌内P13K/AKT通路亦处于异常激活状态,活化的AKT不仅与胃癌的分化、淋巴结转移、恶性程度相关,而且促进了胃癌对化疗药物敏感性的降低。MK-2206作为新型的AKT变构抑制剂,能同时抑制AKT三种亚型,其抗肿瘤效果已在乳腺癌、肺癌、甲状腺癌、鼻咽癌、结肠癌、肝癌等多种肿瘤的体外及体内学实验中得以验证,但关于其在胃癌中的疗效,文献报道不多。本研究目的是通过体外实验探讨MK-2206对胃癌细胞生长的影响,分析其与胃癌常用化疗药物联用时药物之间的联合效应及增强化疗药物抗肿瘤机制,为临床上联合应用MK-2206治疗胃癌提供实验依据。方法：1.不同浓度的MK-2206(0-32μmol/1)作用胃癌SGC-7901及MKN45细胞24,48,72小时。MTS法测定MK-2206对SGC-7901及MKN45细胞的OD490nm值。GraphPad Prism计算各时间段内药物IC50值。2.MK-2206与化疗药物多柔比星及5-氟尿嘧啶均以2倍的稀释梯度联合作用于SGC-7901及MKN45细胞72小时,MTS法测定各孔OD490nm值。(GraphPad Prism计算联合组IC50值,利用Chou-Talalay合并指数方法评价MK-2206联合多柔比星或5-氟尿嘧啶对SGC-7901及MKN45生长抑制的联合效应。3.平板克隆形成实验：1μmol/1MK-2206处理SGC-7901细胞10天,甲醇固定,龙胆紫染色,显微镜下观察计数,计算SGC-7901细胞克隆形成率。4.不同浓度MK-2206(0-16μmol/l)处理胃癌SGC-7901细胞3h和6h,western blot方法分析总AKT及磷酸化AKT表达量。采用1μmol/1MK-2206联合不同浓度多柔比星(0～0.9μmol/l)或5-氟尿嘧啶(0～500μg/m1)处理SGC-7901,western blot检测细胞内AKT信号通路变化及凋亡相关蛋白PARP、cleaved-PARP, caspase3,7,9及cleaved-caspase3,7,9变化。结果：1.MK-2206能有效抑制胃癌SGC-7901及MKN45细胞生长,但其对SGC-7901细胞的抑制作用于8μmol/1后开始明显,对MKN45细胞的抑制作用于4μmol/1起明显。Graphpad Prism软件计算SGC-7901细胞及MKN45细胞24h药物IC50值分别为23.08及19.85μmol/1;48h IC50值为13.95及13.14μmol/l;72hIC50值为8.870及8.939μmol/l。2.MK-2206能协同增强多柔比星及5-Fu对胃癌细胞SGC-7901及MKN45生长抑制作用,以对SGC-7901细胞抑制更加显著。计算MK-2206与多柔比星和5-氟尿嘧啶联合处理SGC-7901细胞的联合指数CI分别为0.21和0.25；而对于MKN45细胞,计算联合指数分别为0.60和0.71。3.平板克隆形成实验显示对照组SGC-7901细胞克隆形成率为38.87+5.9%,1μpmol/1MK-2206组的克隆形成率为18.134±1.8%,两组间差异具有统计学意义(P=0.004)。4. Western blot检测显示1μmol/1MK-2206可在3h内完全抑制SGC-7901细胞内P-AKT表达。不同浓度多柔比星及5-氟尿嘧啶处理SGC-7901细胞后,细胞内AKT可发生短暂的磷酸化水平增加。而加用1μmol/1MK-2206有效抑制多柔比星及5-氟尿嘧啶处理所造成的P-AKT表达,同时通过增强caspase3,7,9及PARP剪切片段表达,增强多柔比星及5-氟尿嘧啶促凋亡作用。结论：通过特异性抑制磷酸化AKT水平,MK-2206能有效抑制胃癌SGC-7901细胞及MKN45细胞增殖,协同增强多柔比星及5-氟尿嘧啶抑制胃癌SGC-7901及MKN45细胞生长。MK-2206可增强多柔比星及5-氟尿嘧啶诱导Caspase家族活化,促进胃癌SGC-7901细胞凋亡,增强胃癌细胞对化疗药物的敏感性。