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表皮生长因子(EGF)是由53个氨基酸组成的单链多肽,1962年由Cohen在小鼠颌下腺中首次发现,后来发现EGF广泛存在于人体体液及各种组织,具有广泛的生物学功能.该研究在已有的rhEGF工作的基础上,开展了fhEGF分泌表达及纯化研究:(1)将合成的EFG基因分别克隆于tac-T<,7>启动子,P<,R>P<,L>启动子下游,并以StⅡ(大肠杆菌热稳定内毒素蛋白)信号肽序列引导,获得大肠杆菌表达载体,PETAC-StⅡE(tac-T<,7>启动子调控)和pJW-StⅡE(P<,R>P<,L>启动子调控).小量诱导表达试验证明,上述两种表达载体均能高效表达EGF并能有效分泌EGF到培养液中.pJW-StⅡE/JM109组合中表达的EGF的量占菌体总蛋白的5-10%左右,其中20%左右EGF分泌到培养液中;(2)选择pJW-StⅡE作为表达载体,利用pJW-StⅡE/JM109体系进行了发酵试验,初步确立了适用于EGF高效表达及分泌的发酵条件;(3)确定了纯化来源于发酵液中的EGF的方法.经疏水层析粗处理发酵液后,利用离子交换浓缩样品,进而用凝胶过滤方法分离纯化EGF.通过上述三个分离步骤可有效地分离纯化rhEGF,最终获得的EGF的纯度达95%以上.