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[目的]比较黄芪中主要成分对于大鼠肝细胞(BRL-3A细胞)氧化应激的干预作用,并选择其中效果较为显著的组分,探讨其对于肝细胞氧化损伤的保护机制。[方法]从同一批次黄芪药材中分别提取粗多糖、总黄酮和总皂苷,按其有效成分含量折算成相同剂量的供试样品,检测三种黄芪成分对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基的清除能力,以及对氧化应激状态下BRL-3A细胞存活率和生成活性氧(ROS)的影响。选择其中效果较好的成分,检测其对于细胞内源性抗氧化酶系统和微粒体酶系的作用。优选上述结果中效果最为显著的单体成分,进一步考察其对氧化应激状态下BRL-3A细胞内源性抗氧化酶系统活力以及活性氧生成等方面的效果,同时检测其对BRL-3A细胞CYP2E1的mRNA转录和蛋白表达、以及细胞凋亡的作用,探讨其对于PI3K/Akt信号通路的影响。使用Changliver细胞建立酒精损伤模型,验证试验药物的抗氧化效果。[结果]源自同一批次黄芪的粗多糖、总黄酮和总皂苷,分别以D-无水葡萄糖、芦丁和黄芪皂苷IV作为对照品测定含量、并据此折算成相同当量用于试验,在清除自由基、提高氧化应激状态的BRL-3A细胞存活率、抑制活性氧产生等方面,黄芪总黄酮和总皂苷的效果明显优于粗多糖;而且总黄酮在提高BRL-3A细胞内源性抗氧化酶系统活力以及抑制介导氧化应激的CYP2E1等方面,效果均明显优于总皂苷。在明确本研究所提取的黄芪总黄酮中毛蕊异黄酮葡萄糖苷(CG)含量符合药典规定的基础上,研究发现,在提高BRL-3A细胞内源性抗氧化酶系统能力以及抑制ROS产生等方面,CG的效果基本上呈剂量依赖关系,且高浓度组(40.mg.L-1)的效果优于同等浓度的阳性对照药物联苯双酯(DDB)。同时,氧化应激能够导致CYP2E1的mRNA转录和蛋白表达上调,而CG能够使其显著下降;对于CYP2E1mRNA的下调作用,中、高剂量的CG效果与阳性对照DDB相当,对于CYP2E1蛋白的下调作用,高剂量的CG效果与阳性对照DDB相当。另外,流式细胞术和DNA Ladder检测均表明氧化应激能促进细胞凋亡而CG可以显著抑制这一趋势。而且氧化应激还导致Akt表达下调和caspase-3活性上调,而CG能够使之发生显著逆转。CG在酒精损伤的Changliver细胞中的抗氧化效果与其在TAA导致的BRL-3A细胞氧化应激中的作用类似。[结论]在来源相同、浓度相当的前提下,黄芪中粗多糖、总黄酮和总皂苷三类成分在清除自由基、提高氧化应激状态下BRL-3A细胞抗氧化能力、抑制微粒体酶活力和ROS产生等方面,总黄酮的效果最为显著。黄芪总黄酮中的主要有效成分CG对于BRL-3A细胞氧化应激同样具有显著的干预作用,其可能的机制是CG抑制了氧化应激导致的CYP2E1表达上调、减少CYP2E1催化产生ROS、从而使过量ROS引起的Akt表达下调得以恢复、进而降低其下游的caspase-3活性、最终抑制氧化应激引起的细胞过度凋亡。