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尽管现在世界上绝大多数国家实施百日咳疫苗的免疫接种,使百日咳感染率和病死率大大下降,但据世界卫生组织(WHO)统计报道,现在全世界每年百日咳患者达数四千万之多,且绝大多数病例来自不发达国家和发展中国家,因此百日咳越来越引起人们重视。百日咳疫苗是预防和控制百日咳的最有效方法。百日咳疫苗包括全细胞疫苗和无细胞百日咳疫苗,由于全细胞疫苗所引起的接种副反应较为严重,将逐渐被接种副反应小而免疫效果好,以百日咳杆菌的两种主要抗原即百日咳毒素(pertussis toxin,PT)和丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)为主要成分的无细胞百日咳疫苗所代替。然而在无细胞疫苗各组分的制备和质量控制等方面,目前还存在一些问题有待于研究和解决,其中之一即尚无一种很好的有效抗原定量检测方法。 本课题采用杂交瘤单克隆技术,运用已建立的间接ELISA法筛选,获得七株分泌抗百日咳毒素(PT)单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)的杂交瘤细胞株和六株抗百日咳丝状血凝素(FHA)McAbs的杂交瘤细胞株,两种杂交瘤细胞株分泌单克隆抗体的Ig类别均为IgG1(κ),效价达1:105—1:107,各株抗PT McAbs能特异性识别PT,与FHA及C型肠毒素无交叉反应,其中McAb1D4和3E4有中和抑制PT簇集CHO细胞的活性,Western blot结果表明2D7、5F9、5F8、1D4和2C25株McAbs均能识别PT抗原的S1亚单位蛋白,McAb 1B8可识别S2亚单位蛋白,McAb 3E4可识别S3亚单位蛋白。6株抗FHA-McAbs均能特异性识别FHA,与流感病毒血凝素及PT无交叉反应,其中McAb 2C2、2G6、1EA和1C7能特异性抑制FHA血凝活性,血凝抑制效价分别为1:64,1:128,1:256