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背景:肝癌(HCC)是世界上的第三大恶性致死原因,每年有100万肝癌患者丧生。肝癌的发生发展与肿瘤转移和生长有关。肿瘤转移是恶性细胞从原发部位向周围部位移动的能力,原发部位称为原发瘤,转移部位称为转移瘤。转移是导致恶性肿瘤进展和蔓延的主要挑战之一。转移是非常复杂的,迁移、侵袭、粘附是恶性肿瘤的重要进程和特质,许多RNA、蛋白质和基因在恶性肿瘤中发生了改变。mi R-124-3p(mi R-124)是HCC中改变的基因之一。Mi RNA是微小非编码RNA,能够转录,但不能翻译为蛋白质,能够通过直接或间接结合到蛋白质的3’UTR来调节基因表达。Mi R-124作为一个下调的mi RNA能够靶向调控许多基因的表达包括ANXA11。ANXA11是钙依赖性磷脂结合蛋白的家族成员,是mi R-124的直接靶点,可由mi R-124调控。然而,mi R-124在肝癌中的作用和mi R-124对HCC中的ANXA11的影响尚未得到很好的解释,因此需要加以探讨。目标:1.检测mi R-124和ANXA11在HCC细胞系(HCC-LM3和Huh7)和正常肝脏细胞株(LO2)中的表达。2.研究mi R-124对HCC-LM3和Huh7中的ANXA11的影响3.检测mi R-124和ANXA11对HCC-LM3和Huh7细胞侵袭和迁移能力的影响4.探究mi R-124和ANXA11对细胞生长和增殖的影响方法:在17对肝癌组织样品及其癌旁对照样本中检测mi R-124表达。采用高转移率HCC-LM3和低转移型Huh7两种人Huh7细胞系及正常肝细胞系LO2进行研究。首先,将三个细胞系从液氮罐中取出,用磷酸盐缓冲盐(PBS)清洗一次,然后在含10%的胎牛血清(FBS)的DMEM中培养,并在37℃含5%CO2的细胞培养箱中培养24小时。然后通过实时荧光定量PCR方法检测mi R-124和ANXA11的表达。通过Western blotting实验测定ANXA11蛋白水平。为了检测mi R-124和ANXA11对HCC-LM3和Huh7细胞的影响,我们转染mi R-124 mimics过表达mi R-124,并且转染ANXA11小干扰序列下调ANXA11。MTT法和克隆形成实验检测mi R-124过表达及ANXA11下调对细胞增殖能力的影响。Transwell小室法检测mi R-124过表达及ANXA11下调对细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:与正常肝脏样本相比,人肝癌组织样本的mi R124表达水平下调(P=0.045)。与LO2相比,以下是以下情况的HCC-LM3 95.8%(P=0.0001)和Huh7 94.8(P=0.0001).通过转染mi R-124 mimics,mi R-124在HCC-LM3和Huh7细胞中分别上调了30倍(P=0.002)和174倍(P=0.0003)。MTT测定结果表明,转染mi R-124 mimics能够抑制细胞的增殖能力,与mimic-NC相比,HCC-LM3细胞中,在48h,72h,96h,120h,细胞增殖能力分别抑制了33.2%(P=.0001),34.7%(P=0001)、33.6%(P=0001)和18.6%(P=0.0004)。Huh7细胞中,在72h,96h,120h,细胞增殖能力分别抑制了24.8%(P=0.009)、21.9%(P=0.0023)和27.94(P=0.0001)。在克隆形成实验中,与mimic-NC相比,mi R-124过表达能够抑制HCC-LM3 50%(P=0.0003)和Huh7 41.1(P=0.004)细胞的克隆形成能力。Transwell结果表明:mi R-124 mimics能够抑制HCC-LM3和Huh7细胞的迁移侵袭能力。在HCCLM3细胞中,迁移和侵袭能力分别抑制了22.9%(P=0.0021)和32.8%(P=0.0014)。而在Huh7细胞中分别抑制了33.3%(P=0.008)和38.9%(P=0.004)。利用生物信息学分析,发现ANXA11可作为mi R-124的直接靶基因.与LO2细胞相比,ANXA11在HCC-LM3(P=0.031和P=0.013)和Huh7(P=0.041和P=0.032)细胞中m RNA和蛋白水平都是上调的。mi R-124过表达后能够抑制ANXA11的m RNA和蛋白水平表达。q-RT-PCR结果表明,ANXA11的表达水平被抑制58%(Huh7,P=0.00062,)和65.7%(HCC-LM3,P=0.0001);此外,Western blotting结果表明:HCC-LM3细胞中,转染ANXA11在48h下调了15%(P=0.042),在72h下调了24%(P=0.026);在Huh7细胞中,ANXA11在48h下调了34%(P=0.016),在72h下调了21%(P=0.0162)。我们通过转染Si-ANXA11下调ANXA11的表达。MTT结果显示,ANXA11下调后能够抑制HCC-LM3和Huh7细胞的增殖能力。与mimic-NC相比,HCC-LM3细胞中,在48h,72h,96h,120h,细胞增殖能力分别抑制了18%(P=0.0005),17.4%(P=0.0001)和14.1%(P=0.018),Huh7细胞中在96h抑制了20.8%(P=0.004)。在克隆形成实验中,与mimic-NC相比,ANXA11下调能够抑制HCC-LM3 50%(P=0.0003)和Huh7 41.1(P=0.004)细胞的克隆形成能力。Transwell结果表明:ANXA11下调能够促进HCC-LM3和Huh7细胞的迁移侵袭能力。在HCC-LM3细胞中,迁移和侵袭能力分别促进了22.9%(P=0.0021)和32.8%(P=0.0014)。而在Huh7细胞中分别促进了61%(P=0.0068)和65%(P=0.009)。结论:与正常肝脏样本相比,人肝癌组织样本的mir124表达水平下调。与正常肝细胞LO2相比,在Huh7和HCC-LM3细胞中mi R-124是低表达的,而ANXA11是上调的。Mi R-124过表达能够抑制Huh7和HCC-LM3细胞的体外增殖、侵袭和迁移能力。在Huh7和HCC-LM3细胞中,过表达mi R-124能够抑制ANXA11的表达。Mi R-124可能直接靶向ANXA11调控肝癌的发生和进展。它们在肝癌中的功能和作用机制值得进一步研究。