背景/目的:线粒体谷胱甘肽（mitochondrial glutathione,mGSH）作为一种细胞抗氧化剂,对人视网膜色素上皮（human retinal pigment epithelium,hRPE）细胞的功能具有重要保护作用。虽然,目前对mGSH的转运机制尚未完全了解,但以往的研究表明,位于线粒体内膜的2-氧戊二酸酯（OGC;SLC25A11）和二羧酸盐（DIC;SLC25A10）作为mGSH转运体,在肝、肾和肺组织细胞中发挥重要作用。本课题主要研究OGC和DIC在hRPE细胞中的表达及定位特性,在氧化应激状态下的表达变化、对细胞凋亡的影响,以及参与调节细胞mGSH平衡的作用。方法:通过免疫印迹和共聚焦显微镜观察OGC和DIC在非极化、极化hRPE细胞以及小鼠视网膜中的表达和定位特性。分别用H2O2、琥珀酸苯基酯（phenylsuccinate,PS）或丙二酸丁酯（butylmalonate,BM）作用于hRPE细胞24小时,观察在不同时间、不同剂量刺激条件下,OGC和DIC的表达变化情况。通过测定抑制OGC或DIC后,细胞凋亡（TUNEL）的变化、mGSH水平以及线粒体DNA含量（mitochondrial DNA,mtDNA）的改变,从而明确OGC和DIC在hRPE细胞中的作用。利用siRNA OGC基因沉默的方法,研究OGC对hRPE细胞凋亡的影响。利用IncuCyte活细胞成像技术测定OGC和DIC的抑制剂对激活Caspase-3/7动力学作用,以及当联合应用谷胱甘肽单乙酯（Glutathione monoethyl ester,GSH-MEE）的细胞变化。检测极性状态对hRPE细胞中OGC和DIC表达的影响以及细胞间连结蛋白（Zonula occudens-1,ZO-1）的变化。结果:OGC和DIC在hRPE细胞的线粒体中表达。在氧化应激的hRPE中OGC和DIC的蛋白表达呈时间和剂量依赖性降低。使用化学抑制剂PS或BM刺激的hRPE中OGC和DIC均明显被抑制,同时细胞死亡数明显增加,mGSH含量显著下降,但mtDNA并未发生明显改变。当抑制剂联合应用GSH-MEE时,细胞死亡数明显降低,mGSH恢复至正常水平。OGC基因沉默使应激状态下的hRPE细胞死亡数明显增加,当补充足量的GSH-MEE,可明显保护细胞、减轻细胞氧化损害、降低细胞死亡率。与非极化hRPE相比,极化细胞中的OGC和DIC蛋白表达明显增加;当抑制OGC或DIC时,极化hRPE细胞之间的紧密连接蛋白ZO-1明显被破环,联合应用GSH-MEE可改善这种细胞结构的破坏。结论:本研究首次揭示hRPE细胞中OGC和DIC的表达和定位特性,以及它们参与摄取mGSH作用。通过调节hRPE细胞中OGC和DIC对mGSH的摄取作用,可能对今后治疗年龄相关性黄斑变性（age related macular degeneration,AMD）等视网膜疾病具有重要价值。