在对人类有严重危害的疾病中，恶性肿瘤的发生发展最为受人关注，如何能有效抑制，杀伤肿瘤细胞，关键在于了解肿瘤发生的机制和寻找合适的治疗靶点，这是治疗肿瘤的一项重要的基础工作。蛋白酪氨酸磷酸酶α(PTPα)是一种典型的受体型蛋白质酪氨酸磷酸酶，它可以催化蛋白分子中特定位点的磷酸化酪氨酸残基脱磷酸，以级联反应方式与其它蛋白磷酸酶在细胞内构成调控网络，与蛋白酪氨酸激酶(PTK)的作用相反，共同调节细胞信号转导，在细胞生长、分化、引导有丝分裂、T细胞活化等生理过程中起着重要的作用，尤其在控制细胞磷酸化酪氨酸水平上，蛋白酪氨酸磷酸酶起着非常特异性的积极作用，甚至占据了主导地位。本文对NIH3T3细胞中PTPα过表达产生的蛋白质差异表达进行了研究。主要内容如下： ⑴合成PTPα对应的cDNA引物，通过PCR实验，验证这株稳定转染PTPα诱导表达质粒的NIH3T3细胞，PTPα基因在DNA水平上是否具有明显差异，验证之前导入的质粒是否丢失；通过RT-PCR实验，验证其在DOX调控下，PTPα在RNA表达水平上是否具有明显差异；制备PTPα特异性抗体，通过WESTERN-BLOT实验，验证其在DOX调控下，PTPα在蛋白质表达水平上是否具有明显差异。 ⑵获取并纯化NIH3T3细胞总蛋白，BCA法进行蛋白定量并进行二维电泳，分析二维电泳差异点，对差异蛋白点进行质谱分析 ⑶合成差异蛋白对应cDNA的引物，通过RT-PCR和REALTIME-PCR实验，验证差异蛋白在相应的RNA表达水平上是否具有明显差异；利用磷酸化酪氨酸残基抗体，观察稳定转染PTPα诱导表达质粒的NIH3T3细胞，在DOX调控下，磷酸化酪氨酸蛋白含量的变化。