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阿尔茨海默病(Alzheimers disease，AD)亦名老年性痴呆(seniledementia)，是中枢神经系统一种常见的进行性神经退行性疾病。主要病理特征是在大脑皮层和海马区域出现老年斑、神经原纤维缠结和血管壁淀粉样变并伴随神经元丧失，而Aβ是AD脑内异常释放与沉积的蛋白质性物质，在神经元的凋亡过程中发挥了重要作用，细胞凋亡活动过盛可能是AD渐进性神经退变的重要原因之一。
骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)或称为骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)具有干细胞特性，有多向分化的潜能，同时MSCs取材容易，在体外容易培养和增殖，又避免了神经干细胞移植的免疫排斥反应，骨髓间质干细胞在体内外都可向神经系统分化，弥补了神经干细胞来源困难的问题因而骨髓间质干细胞作为神经细胞的另一来源，用于中枢神经系统疾病及其损伤修复的细胞学治疗基础，具有更广阔的应用前景，并成为生命科学的一个新的研究热点。PC12细胞为大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞，其所含的受体及递质与胆碱能神经元相似，能与原代培养的神经细胞说明一致的问题，所以Aβ1-40制备的PC12细胞模型常作为研究AD的细胞模型。胆碱能神经元的保护作用考虑与其能分泌的细胞因子有关。本实验采用体外培养、纯化MSCs并收集其条件培养液，通过评价MSCs分泌物对Aβ1-40诱导的PC12细胞活力和凋亡的影响，初步探讨MSCs分泌物对Aβ1-40诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。
实验方法：
1、原代骨髓基质细胞培养液的收集和浓缩
2、BMSCs细胞表面分子测定(流式细胞仪检测)
3、PC12细胞培养和药物处理
实验分组为：①正常PC12细胞培养组(空白对照组)：在细胞培养体系中不加入任何药物和上清液；②MSCs上清液组：细胞接种后24h在细胞培养体系中加入MSCs上清液30μl、60μl、120μl，并用5％FBS/RPM1164O将终体积补足至300ul，使MSCS上清液体积分数分别为10％、20％、40％。③Aβ1-40损伤组：以10μg/ml Aβ1-40刺激PC12细胞，终浓度为5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml；换用1640培养24小时后，收集受损PC12上清培养液；④MSCs上清液与Aβ1-40共培养组(联合组)：以10μg/ml Aβ1-40刺激PC12细胞过夜(AD细胞模型)，除去培养上清，换用1640培养24小时后，收集受损PC12上清作为条件培养液，分别给予MSCs上清液30μl，60μl，120μl各组细胞给药后24h和48h进行下列指标的检测。
4、细胞活力测定(MTT法)
5、透射电镜观察PC12细胞凋
6、PI染色流式细胞仪(FCM)检测PC12细胞凋亡
7、MSCs上清液对Aβ1-40损伤PC12细胞凋亡的影响
8、统计学处理：采用SPSS11·5 for Windows软件进行检验。所有资料以X±SD表示，两组间比较用t检验，P<0.05为有统计学差异，P<0.01认为具有显著性差异。
结果：
1、MSCs可在体外分离扩增，MSCs表面抗原鉴定通过免疫荧光检测显示CD44阳性而CD45阴性
2、MSCs上清液可以抵抗Aβ1-40刺激PC12细胞的细胞毒作用，提高细胞生存率
(1)Aβ1-40能降低PC12细胞活力并且PC12细胞活力的变化与Aβ1-40浓度和时间有关。Aβ1-40浓度越大，对细胞的毒性作用越大。处在同一浓度的Aβ1-40中的PC12细胞作用时间越长，损害越多。
(2)MSCs上清液加Aβ1-40处理组表明MSCs上清液可以有效保护Aβ1-40对PC12细胞的毒性损伤，并且浓度越高MSCs上清液的保护作用越好。且相邻剂量间比较有显著性差异(P<0.05)；
3、透射电镜能观察到Aβ1-40所致PC12细胞凋亡
4、MSCs上清液可以减轻Aβ1-40诱导的PC12细胞凋亡从而对细胞产生保护作用
(1)不同浓度Aβ41-40对PC12细胞凋亡的影响为浓度越高细胞的凋亡率越增加；
(2)MSCs上清液对Aβ1-40诱导PC12细胞凋亡的影响结果提示MSCs上清液可明显减轻Aβ1-40对PC12细胞的凋亡诱导作用；随着MSCs上清液浓度的增加，其减轻Aβ1-40对PC12细胞的凋亡作用在增加。
结论：
MSCs可在体外分离扩增，MSCs能分泌多种对退变胆碱能神经元有保护作用的神经营养因子，Aβ1-40能诱导PC12细胞凋亡，MSCs对Aβ1-40诱导的PC12细胞凋亡有保护作用，这种保护作用的强弱与其上清液浓度有关。因此本研究为MSCs治疗老年性痴呆提供了一定的实验基础。
骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)或称为骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)具有干细胞特性，有多向分化的潜能，同时MSCs取材容易，在体外容易培养和增殖，又避免了神经干细胞移植的免疫排斥反应，骨髓间质干细胞在体内外都可向神经系统分化，弥补了神经干细胞来源困难的问题因而骨髓间质干细胞作为神经细胞的另一来源，用于中枢神经系统疾病及其损伤修复的细胞学治疗基础，具有更广阔的应用前景，并成为生命科学的一个新的研究热点。PC12细胞为大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞，其所含的受体及递质与胆碱能神经元相似，能与原代培养的神经细胞说明一致的问题，所以Aβ1-40制备的PC12细胞模型常作为研究AD的细胞模型。胆碱能神经元的保护作用考虑与其能分泌的细胞因子有关。本实验采用体外培养、纯化MSCs并收集其条件培养液，通过评价MSCs分泌物对Aβ1-40诱导的PC12细胞活力和凋亡的影响，初步探讨MSCs分泌物对Aβ1-40诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。
实验方法：
1、原代骨髓基质细胞培养液的收集和浓缩
2、BMSCs细胞表面分子测定(流式细胞仪检测)
3、PC12细胞培养和药物处理
实验分组为：①正常PC12细胞培养组(空白对照组)：在细胞培养体系中不加入任何药物和上清液；②MSCs上清液组：细胞接种后24h在细胞培养体系中加入MSCs上清液30μl、60μl、120μl，并用5％FBS/RPM1164O将终体积补足至300ul，使MSCS上清液体积分数分别为10％、20％、40％。③Aβ1-40损伤组：以10μg/ml Aβ1-40刺激PC12细胞，终浓度为5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml；换用1640培养24小时后，收集受损PC12上清培养液；④MSCs上清液与Aβ1-40共培养组(联合组)：以10μg/ml Aβ1-40刺激PC12细胞过夜(AD细胞模型)，除去培养上清，换用1640培养24小时后，收集受损PC12上清作为条件培养液，分别给予MSCs上清液30μl，60μl，120μl各组细胞给药后24h和48h进行下列指标的检测。
4、细胞活力测定(MTT法)
5、透射电镜观察PC12细胞凋
6、PI染色流式细胞仪(FCM)检测PC12细胞凋亡
7、MSCs上清液对Aβ1-40损伤PC12细胞凋亡的影响
8、统计学处理：采用SPSS11·5 for Windows软件进行检验。所有资料以X±SD表示，两组间比较用t检验，P<0.05为有统计学差异，P<0.01认为具有显著性差异。
结果：
1、MSCs可在体外分离扩增，MSCs表面抗原鉴定通过免疫荧光检测显示CD44阳性而CD45阴性
2、MSCs上清液可以抵抗Aβ1-40刺激PC12细胞的细胞毒作用，提高细胞生存率
(1)Aβ1-40能降低PC12细胞活力并且PC12细胞活力的变化与Aβ1-40浓度和时间有关。Aβ1-40浓度越大，对细胞的毒性作用越大。处在同一浓度的Aβ1-40中的PC12细胞作用时间越长，损害越多。
(2)MSCs上清液加Aβ1-40处理组表明MSCs上清液可以有效保护Aβ1-40对PC12细胞的毒性损伤，并且浓度越高MSCs上清液的保护作用越好。且相邻剂量间比较有显著性差异(P<0.05)；
3、透射电镜能观察到Aβ1-40所致PC12细胞凋亡
4、MSCs上清液可以减轻Aβ1-40诱导的PC12细胞凋亡从而对细胞产生保护作用
(1)不同浓度Aβ41-40对PC12细胞凋亡的影响为浓度越高细胞的凋亡率越增加；
(2)MSCs上清液对Aβ1-40诱导PC12细胞凋亡的影响结果提示MSCs上清液可明显减轻Aβ1-40对PC12细胞的凋亡诱导作用；随着MSCs上清液浓度的增加，其减轻Aβ1-40对PC12细胞的凋亡作用在增加。
结论：
MSCs可在体外分离扩增，MSCs能分泌多种对退变胆碱能神经元有保护作用的神经营养因子，Aβ1-40能诱导PC12细胞凋亡，MSCs对Aβ1-40诱导的PC12细胞凋亡有保护作用，这种保护作用的强弱与其上清液浓度有关。因此本研究为MSCs治疗老年性痴呆提供了一定的实验基础。