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目的:Ⅰ型胶原羧基端交联肽(C-terminal telopeptides of type I collagen, CTX)是Ⅰ型胶原的降解产物,为骨吸收的特异标志物。本研究的目的在于检测健康人和牙周炎患者龈沟液中骨转化标记物CTX的水平,研究其在牙周炎病变过程中的变化趋势,探讨其对牙周炎活动期诊断的价值,并通过龈下菌斑胰蛋白酶样酶水平与龈沟液中CTX浓度的相关分析,初探牙周炎重要可疑致病微生物所产生的胰蛋白酶样酶在Ⅰ型胶原降解中的作用。方法:1临床资料:本实验选取到和平医院口腔科门诊就诊的牙周炎患者和和平医院口腔科医护人员共60例,采集龈沟液标本和相对应的龈下菌斑标本各77份。2记录临床指数:菌斑指数:据Quigley-Hein标准,分为0-5级牙龈指数:据Loe-Silness标准,分为0-3级牙周袋最大探诊深度:要求探测从袋底(或龈沟)到龈缘的距离,探诊牙周袋或龈沟的最深点记录为最大探诊深度附着丧失:分为无附着丧失、轻度附着丧失、中度附着丧失、重度附着丧失四个等级牙齿松动度:分为Ⅰ度、Ⅱ度、Ⅲ度3使用CTX ELISA试剂盒测定龈沟液中CTX水平4液相BANA试验:取1mM的BANA 100μl加入酶联反应板孔内,然后加入100μl菌斑标本,37℃孵育过夜,次日酶联反应板孔内加入0.25%坚牢黑K盐呈色,37℃,5分钟后观测结果。用酶联免疫检测仪测定450nm波长下光密度值。结果:1健康牙龈组龈沟液中CTX测定结果: 30份健康牙龈组龈沟液中CTX的浓度均值为140.17±32.94nmol/l。2成人牙周炎组龈沟液CTX水平测定结果: 47份成人牙周炎龈沟液中CTX浓度均值为362.07±165.26nmol/l。3 21份成人牙周炎活动期组龈沟液中CTX浓度测定值的中位数M为:522.21,推算本组龈沟液CTX浓度值95%可信区间为: 382.78-786.41nmol/l。26份成人牙周炎相对静止期组龈沟液CTX浓度测定值的中位数M为:250.29,推算本组龈沟液CTX浓度值95%可信区间为:180.24-354.58nmol/l。4健康牙龈组、成人牙周炎组龈沟液CTX水平测定结果:两组龈沟液CTX浓度的测定值,经方差分析方差不齐,秩和检验(Mann-Whitney Test) P=0.000, P<0.05,差异有统计学意义。5成人牙周炎活动期组与相对静止期组龈沟液CTX水平测定结果:成人牙周炎活动期组与相对静止期组龈沟液CTX浓度的测定值为偏态资料,采用秩和检验(Mann-Whitney Test) P=0.000, P<0.05,差异有统计学意义。6临床指数与龈沟液CTX测定值的关系6.1菌斑指数与龈沟液CTX测定值的关系菌斑指数不同分值所对应的龈沟液CTX的浓度,经秩和检验P<0.05,提示菌斑指数不同分值所对应的龈沟液CTX浓度之间的差异有统计学意义。龈沟液中CTX的浓度与菌斑指数的关系,经Spearman秩相关检验r= 0.386, P=0.000; P<0.05,提示龈沟液中的CTX的浓度与菌斑指数在统计学上存在正相关。6.2牙龈指数与龈沟液CTX测定值的关系将牙龈指数为0或1的受试牙合并为一组(因牙龈指数为1的样本数仅2例)分别与牙龈指数为2、3所对应的龈沟液中CTX的浓度,作统计分析,经秩和检验P<0.05,差异有统计学意义。龈沟液中CTX的浓度与牙龈指数的关系,经Spearman秩相关检验r= 0.366, P=0.000; P<0.05,提示龈沟液中的CTX的浓度与牙龈指数在统计学上存在正相关。6.3牙周袋最大探诊深度与龈沟液CTX测定值的关系不同牙周袋最大探诊深度所对应的龈沟液中CTX浓度的测定值,经秩和检验P<0.05,差异有统计学意义。龈沟液中CTX浓度与牙周探诊深度的关系,经Spearman秩相关检验r=0.382, P=0.000; P<0.05,提示龈沟液中CTX的浓度与牙周探诊深度在统计学上存在正相关。6.4附着丧失与龈沟液CTX测定值的关系无附着丧失和轻度附着丧失(由于轻度附着丧失样本数太少,将其两者合并为一组)与中度附着丧失、重度附着丧失组对应的龈沟液中CTX的浓度,经秩和检验P<0.05,差异有统计学意义。龈沟液中CTX的浓度与附着丧失的关系,经Spearman秩相关检验r=0.314, P=0.000; P<0.05,提示龈沟液中的CTX的浓度与附着丧失在统计学上存在正相关。6.5牙齿松动度与龈沟液CTX测定值的关系不同牙齿松动度所对应龈沟液中CTX的浓度,经秩和检验P>0.05,差异无统计学意义。7 CTX浓度的测定值与龈下菌斑BANA测定值的关系龈沟液CTX的浓度与龈下菌斑标本BANA试验OD450nm测定值的关系经Spearman秩相关检验r=0.468, P=0.000;P<0.05,差异有统计学意义。提示龈沟液中CTX的浓度与BANA实验OD450nm测定值在统计学上存在正相关。结论:1健康牙龈组龈沟液中CTX平均浓度为140.17±32.94mol/l;牙周炎组龈沟液中CTX平均浓度为362.07±165.26nmol/l。推算出牙周炎活动期组龈沟液中CTX浓度值95%参考值范围为: 382.78-786.41nmol/l;牙周炎相对静止期组龈沟液中CTX浓度值95%参考值范围为: 180.24-354.58nmol/l。2成人牙周炎组龈沟液CTX的浓度明显高于健康牙龈组。提示龈沟液中CTX水平的变化与牙周病变发展密切相关,龈沟液中CTX的水平有可能作为评价牙周炎牙周组织破坏程度的参考指标。3牙周炎是一种活动期、静止期交替的组织病变。本课题证实了在活动期牙周炎患者龈沟液中CTX的浓度值明显高于相对静止期,提示龈沟液中CTX水平可作为判断牙周炎活动期的参考指标。4龈沟液中CTX浓度的测定值与菌斑指数、牙龈指数、牙周探诊深度、附着丧失在统计学上均存在正相关关系,但表示关系密切程度的确定系数(r2)的数值均不大。提示牙周临床指数只能粗略进行牙周病变的活动性评价,而龈沟液中CTX水平在一定程度上比其它牙周检查指标更早、更准确的反映牙周炎病程期间牙周组织的破坏状况。5龈沟液中CTX的浓度与龈下菌斑标本BANA试验OD450nm测定值在统计学上存在正相关关系,提示牙周病关键致病微生物:牙龈卟啉单胞菌、齿密螺旋体、福赛氏类杆菌所产生的胰蛋白酶样酶,在Ⅰ型胶原降解CTX的过程中可能发挥一定作用,但具体机制还需进一步研究。