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乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，患病率在全球呈现上升趋势，严重威胁着女性的身心健康，因此对乳腺癌进行有效的诊断和合理的治疗显得尤为重要。在乳腺癌患者中，大约有20％-30％的患者有HER2/neu基因的扩增和(或)过表达，由于HER2/neu基因的扩增和(或)过表达同乳腺癌的预后有关，并对临床治疗有指导作用，因此美国临床肿瘤协会(ASCO)和美国国家综合癌症网(NCCN)建议所有乳腺癌患者的HER2/neu基因状态都应进行检测。目前通过FDA认证的检测方法是IHC和FISH，而IHC是临床和实验室使用最多的检测方法，但是该方法判读时主观性强，抗体差异常导致结果的不同，使得检测结果准确性较差。FISH被大多数学者认为是检测HER2/neu水平的“金标准”，它具有直接对基因进行定量检测，判读客观，可以区分HER2蛋白中度阳性(IHC结果为2+)的患者等特点，但目前由于市场上只有国外探针试剂盒销售，其费用昂贵，限制了该方法在国内临床的应用。因此临床迫切需要我国自主研发的试剂盒。本研究的目的是建立检测乳腺癌HER2基因状态的荧光原位杂交诊断体系，通过对不同病理类型的原发性乳腺癌患者组织中HER2/neu基因状态的定量分析，初步了解HER2/neu基因在整个乳腺癌患者中的扩增率，探讨HER2/neu基因状态同乳腺癌各种临床，病理和生物学因素的相关性；比较IHC法和FISH两种方法之间的一致性和相关性以及优缺点，制定最为合理的乳腺癌诊断治疗策略。
材料和方法：
1.研究对象：本实验从2006年1月-2008年12月共收集了5例肿瘤组织毗邻的正常乳腺组织石蜡包埋切片，50例在病理学上确诊为原发性乳腺癌的初治患者的石蜡包埋切片。
2.实验方法：根据17号染色体着丝粒序列设计合成特异的引物和探针，使用ARESAlexaFluor488DNAlabelingkit制备17号染色体着丝粒区荧光原位杂交探针。对所选BAC克隆进行切口平移标记荧光素，制备HER2/neu基因特异的荧光原位杂交探针。使用外周血和SK-BR-3人乳腺腺癌细胞对两种探针的特异性，灵敏度等进行分析。对石蜡组织切片的蛋白酶K消化时间进行优化，建立荧光原位杂交(FISH)法检测HER2/neu基因状态的诊断体系。收集50例不同类型的乳腺癌患者的石蜡包埋切片标本，用已建立的荧光原位杂交(FISH)法进行检测。
3.统计学分析：两种方法的独立性检验以及检测结果同各因素之间的相关性采用x2检验，若不能满足x2检验条件则采用Fisher确切概率法。
实验结果：
1.荧光原位杂交(FISH)法检测HER2/neu方法的成功建立。
制备的探针特异性高，点的亮度佳，镜下易于清晰辨认，且杂交率高，90％的细胞杂交理想。
2.石蜡包埋组织切片蛋白酶K消化时间的确定
消化15-20分钟后，背景干净，细胞界限清楚，细胞形态清晰，杂交后细胞内可见清晰的两个红点，信号强度好，容易分辨计数。故可以确定20mg/ml的蛋白酶K对石蜡包埋组织切片的理想消化时间为15-20分钟。
3.临床标本检测结果
3.1乳腺癌患者HER2/neu，雌激素受体(ER)，孕激素受体(PR)的免疫组化检测
本实验对50例乳腺癌患者组织标本的HER2/neu基因，雌激素受体和孕激素受体状态进行了病理检测。结果为，在乳腺癌组织中，HER2/neu无过表达的有29例，表达在2+以上的病例数有21例，过表达比例为42％；ER表达正常33例，异常表达17例；PR表达正常29例，异常表达21例。
3.2乳腺癌患者HER2/neu基因的检测结果
在50例乳腺癌中有19例患者有HER2/neu基因扩增(38％)，与免疫组化检测HER2/neu蛋白结果具有同一性(86％，P＜0.05)，其中在ER表达阳性的患者中有3例HER2/neu基因扩增，16例无扩增；在PR阳性的患者中有5例HER2/neu基因扩增，14例无扩增；在19例HER2/neu基因扩增的患者中有18例属于浸润性导管癌，1例属于浸润性小叶癌；在年龄≤50岁的患者中有7例有HER2/neu基因的扩增，在年龄＞50岁的患者中有12例有HER2/neu基因的扩增。统计结果表明HER2/neu基因的扩增同ER的表达之间具有相关性，而与PR的表达状态，肿瘤的病理分型，年龄无关。
结论：
1.成功制备了17号染色体着丝粒区和HER2/neu特异位点探针，建立了荧光原位杂交(FISH)法检测HER2/neu基因状态体系。
2.免疫组化检测HER2/neu蛋白表达状态同荧光原位杂交(FISH)法检测HER2/neu基因状态具有同一性(86％，P＜0.05)。
3.在38％的乳腺癌患者中存在HER2/neu基因的扩增。
4.乳腺癌患者HER2/neu基因的扩增与ER的状态具有相关性，同PR的状态，年龄，肿瘤的病理类型没有相关性。
5.荧光原位杂交(FISH)法检测HER2/neu基因的扩增具有特异性、灵敏性高，稳定性好，定量判断，结果客观等特点可以弥补IHC法的不足，两种方法在临床实验室诊断中联合使用可以使乳腺癌HER2状态的检测更为准确，为临床预测预后，制定治疗方案，指导用药等方面提供更好的参考和指导。