[目的]前列腺癌是一种高发的恶性肿瘤，其早期诊断和及时治疗对前列腺癌患者的预后有非常重要的临床意义。PSMA是新近发现的前列腺癌相关抗原，具有良好的组织特异性，使它成为最具诊断和靶向治疗价值的癌标。抗PSMA的单克隆抗体因其独特的优势越来越显示出它的临床应用价值和前景。本实验旨在用合成多肽抗原制备抗PSMA单克隆抗体，为建立免疫学和血清学检测方法和PSMA的功能研究奠定基础，并可在此基础上制备人源化抗体，为前列腺癌的放射显像诊断和免疫导向治疗提供物质基础，对前列腺癌的诊断和治疗有着重要意义。 [方法] 以PSMA的氨基酸序列为基础，找出符合条件的优势B细胞表位序列并对所获得的表位进行计算机分子建模，设计2段12个氨基酸长的短肽，用固相化学合成法人工合成。为增强免疫原性，在多肽的C-端分别接上一个Cys，用马来酸亚胺活化法与钥孔鏚血蓝素(KLH)或牛血清白蛋白(BSA)偶联构成免疫原，多肽-KLH偶联复合物用于免疫BALB/c小鼠，多肽-BSA偶联复合物用于间接ELISA法检测小鼠血清和杂交瘤细胞上清及腹水的抗体效价。用多肽-KLH偶联复合物免疫BALB/c小鼠，三次免疫，免疫效果用免疫荧光法和ELISA法检测。采用PEG法，取免疫效价高的脾细胞与来自同系小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0融合。用HAT选择培养基筛选融合细胞，克隆生长孔用酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫荧光法监测上清抗体效价，筛选出抗PSMA阳性克隆。阳性克隆经过4次有限稀释法克隆化培养得到2株均一的稳定分泌抗PSMAmAb的杂交瘤细胞株。将杂交瘤细胞注入经降植烷预处理的BALB/c小鼠腹腔制备腹水型mAb，并对其进行了鉴定分析，包括免疫球蛋白类别及亚型鉴定、特异性的鉴定、敏感性鉴定、相对亲和力鉴定、抗原结合位点测定、耐冻融性测定、热稳定性测定、不同pH值条件对单抗稳定性影响的测定。采用简便、快速的饱和硫酸铵粗提法纯化腹水，用SDS-PAGE进行分析，并用Westernblotting法检测相应PSMA蛋白。利用免疫组化法鉴定制备的mAb，且初步应用于检测前列腺癌、良性前列腺增生组织PSMA的分布。 [结果] 获得两株可稳定分泌PSMA单克隆抗体的杂交瘤细胞株，4F4为IgG1类，1F1为IgG3类。两株单抗均能识别LNCap细胞的PSMA蛋白，与不表达PSMA的PC-3细胞，BIU，Hela等细胞无交叉反应；杂交瘤细胞株1F1培养上清效价为1∶40，腹水效价为1∶6400；而杂交瘤细胞株4F4培养上清效价为1∶80，腹水效价为1∶8000；2株mAb的相对亲和力为mAb4F4株＞mAb1F1株；ELISA单抗相加实验示AI＞50％表明两抗体针对不同的抗原决定簇；两株mAb耐冻融性强，4F4较1F1耐热性好，且在中性条件和偏碱性条件下稳定，而在酸性条件下不稳定；用饱和硫酸铵粗提法纯化的mAb纯度高，操作简便、快速，SDS-PAGE电泳分析结果，重链分子量约52KD，轻链分子量约为20KD；用Westernblotting法可检测出100KD的PSMA蛋白。经免疫组化可知此单抗能特异性和组织中PSMA结合，且前列腺癌组织染色强度、范围与正常前列腺和前列腺增生组织存在明显差异。 [结论] 1.利用合成肽抗原，成功建立了2株能稳定分泌针对不同抗原表位的抗PSMA单抗的杂交瘤细胞株。 2.免疫荧光证实该2株单抗能识别天然PSMA蛋白，Western-blot证实其具有PSMA的高度特异性，显示了广泛的应用前景。 3.已鉴定出该2株单抗的基本特性，为其开发和应用提供实验参数和依据。 4.应用免疫组化，初步证实了PSMA在不同前列腺组织的表达关系，为揭示PSMA和肿瘤发生相关性提供了线索。