【摘 要】
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胃癌是一种常见的恶性肿瘤,整体预后较差,临床上根据肿瘤的分期和病理决定治疗策略。胃癌的前期治疗通常以手术切除为主,但因其发病较为隐匿,大部分患者发现时已是中晚期,错过最佳治疗时期。目前中晚期胃癌常用的治疗手段有化疗、放疗、免疫疗法、激素疗法等,但这些方法都具有局限性,迫切需要新的治疗方法。癌细胞中不仅发生癌基因和肿瘤抑制基因表达的失调,而且由于这些变化导致数百个基因表达的改变。因此,可以筛选和鉴定
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胃癌是一种常见的恶性肿瘤,整体预后较差,临床上根据肿瘤的分期和病理决定治疗策略。胃癌的前期治疗通常以手术切除为主,但因其发病较为隐匿,大部分患者发现时已是中晚期,错过最佳治疗时期。目前中晚期胃癌常用的治疗手段有化疗、放疗、免疫疗法、激素疗法等,但这些方法都具有局限性,迫切需要新的治疗方法。癌细胞中不仅发生癌基因和肿瘤抑制基因表达的失调,而且由于这些变化导致数百个基因表达的改变。因此,可以筛选和鉴定胃癌中失调的基因作为诊断胃癌的标志物和潜在的治疗靶点,以促进胃癌治疗方法的开发。黄酮类化合物是一种天然产物,其来源广泛,价格低廉,毒副作用小,在许多研究证明这类化合物具有抗癌作用。白杨素作为其中一种,主要存在于蜂蜜中,其表现出许多生物活性和药理作用,包括抗氧化、抗癌、抗炎、抗病毒活性、抗肿瘤特性等,它已作为各种类型癌症的治疗剂被广泛研究。本研究拟阐明白杨素如何调节基因表达及其在对胃癌细胞抑制作用。首先,我们确定了白杨素处理胃癌细胞的最佳剂量,分析了对细胞生长和细胞凋亡的影响。其次,通过使用RNA测序(RNA-seq),我们确定了用白杨素处理的胃癌细胞中差异表达的基因,通过生物信息学分析等方法进一步预测了其发挥作用的信号通路,通过过表达和敲低COPB2,H19和let-7a对该信号通路进行验证。此外,使用CRISPR/Cas9系统敲除了胃癌细胞的COPB2基因,用于体内肿瘤的生长分析。本研究表明,40μM白杨素是处理胃癌细胞的最佳剂量,白杨素可以显著抑制细胞增殖并且诱导胃癌细胞凋亡。RNA测序结果表明差异表达的基因在细胞死亡和生长中发挥重要作用,COPB2鉴定为差异表达的m RNA并且用白杨素处理胃癌细胞后COPB2显著下调。有研究发现,原发性胃腺癌肿瘤患者中COPB2的高水平表达以及在胃癌细胞系中COPB2的表达水平较高,表明COPB2可能在胃癌的发展中发挥着重要作用。鉴于长链非编码RNA(lnc RNA)在胃癌的发生、转移、预后中发挥重要作用,我们进一步确定了COPB2在胃癌细胞中高表达的潜在机制,检测了胃癌细胞中H19和let-7a的表达。结果发现,H19在胃癌细胞系MKN45、SGC7901和BGC823细胞中的表达增加,白杨素处理显著增加了let-7a的表达,降低了H19和COPB2的表达。此外,我们发现,CRISPR/Cas9系统敲除了胃癌细胞的COPB2基因后,COPB2的表达减少显著抑制细胞增殖。最后,体内数据显示白杨素给药处理和COPB2缺失均抑制了小鼠肿瘤的生长,表明白杨素可通过调节COPB2的表达抑制体内肿瘤的生长。综上所述,本研究表明白杨素可抑制胃癌细胞增殖并通过H19/COPB2轴发挥抗肿瘤作用,为胃癌的治疗提供了一种新的策略。
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