麦门冬汤对人皮肤成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原合成的影响

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目的:观察麦门冬汤对人体皮肤成纤维细胞(HSAS1)增殖活性及胶原合成的影响,探讨系统性硬皮病(SSc)的中医治疗新思路,亦为中医“肺合皮毛”理论提供参考依据。方法:①含药血清及西药的制备:将60只清洁级SD大鼠随机分为麦门冬汤组、中药对照组、正常对照组,每组20只。麦门冬汤组大鼠以麦门冬4.24g/100g/d,(即按此生药浓度计算每1ml药液内含生药量4.24g)每日1次灌胃;对照组大鼠以当归四逆汤2.44g/100g/d(即按此生药浓度计算每1ml药液内含生药量4.24g),每日1次灌胃;正常对照组大鼠按麦门冬汤组剂量给予同体积生理盐水灌胃,上三组均灌胃一周。3组大鼠末次给药6h后腹主动脉取血,离心取上清,经灭活处理,无菌过滤器过滤、分装,-70℃保存备用。薄芝组(600μg/ml薄芝糖肽培养液):取薄芝糖肽注射液3支,(每支2ml,含5mg多糖:1mg多肽)加入24mlDMEM高糖完全培养基,配成600μg/ml薄芝糖肽培养液,4℃保存备用。(给药剂量根据临床60kg体重成人用量6mg/kg/d推算)。②HSAS1细胞的培养。③含药血清及薄芝糖肽干预HSAS1细胞。④MTT比色法检测麦门冬汤对HSAS1增殖活性的影响。⑤用流式细胞仪技术和AO/EB染色法分别检测麦门冬汤对HSAS1凋亡的影响。⑥用荧光定量PCR方法检测麦门冬汤对Ⅰ型胶原mRNA表达的影响。结果:①不同时间,麦门冬汤低、中、高剂量组HSAS1吸光OD值低于正常对照组,其差异有统计学意义(P<0.01);当归四逆汤低、中、高剂量组HSAS1吸光OD值低于正常对照组,其差异有统计学意义(P<0.01);麦门冬汤高剂量组与当归高剂量组HSAS1吸光OD值最低,两组相比差异无统计学意义(P>0.05)。②薄芝组HSAS1吸光OD值在36h、48h低于正常对照组,与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);薄芝糖肽HSAS1吸光OD值高于中药血清组,其差异有统计学意义(P<0.05)。③随血清浓度的增加,麦门冬汤血清对HSAS1的增殖抑制率升高;当归四逆汤随血清浓度的增加对HSAS1的增殖抑制率升高;薄芝糖肽对HSAS1的增殖抑制率无明显影响。④麦门冬汤血清组HSAS1的凋亡指数高于正常对照组,其差异有统计学意义(P<0.05)。⑤各用药组皮肤成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达量均低于正常对照组,其差异有统计学意义(P<0.01)。⑥麦门冬汤高剂量血清与当归高剂量血清能降低皮肤成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达量,与薄芝糖肽相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:①随血清浓度和用药时间的增加,麦门冬汤血清、当归四逆汤血清对HSAS1增殖活性的抑制作用逐渐增强,抑制作用与给药浓度和时间呈正相关。②麦门冬汤含药血清能抑制HSAS1的生长,高剂量血清抑制作用最强,可能中药血清量需要达到一个蓄积量,才能发挥明显作用。③麦门冬汤含药血清能促进HSAS1的凋亡,促进细胞凋亡可能是麦门冬汤抑制HSAS1增殖的机制之一。④麦门冬汤含药血清可以降低HSAS1Ⅰ型胶原mRNA的表达量。⑤与当归四逆汤相比,麦门冬汤也能影响HSAS1的增殖、凋亡。由此可见,气阴两虚也可能是SSc的病机之一。⑥治肺经方麦门冬汤能抑制HSAS1的增殖,进而影响Ⅰ型胶原的合成,为SSc的中医治疗提供了新思路。⑦麦门冬汤对SSc的作用机制有待进一步研究。
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