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鸡球虫病(Coccidiosis)是由一种以肠道病变为主的寄生虫病,给养鸡业造成了巨大经济损失。目前鸡球虫病主要以药物防治为主,但由于药物残留和耐药性问题,使得一些药物难以发挥其有效的疗效。球虫疫苗的研究,特别是新型球虫核酸疫苗研究,逐渐成为球虫病防治研究的新焦点。本试验根据已发表的堆型艾美尔球虫(E. acervulina) Ea1A基因序列设计引物,成功克隆上海株堆型艾美尔球虫的部分Ea1A基因,大小为1256 bp。同时构建Ea1A和ChIL-18的原核表达质粒,表达大小分别为51 KDa和26 KDa的Ea1A和ChIL-18蛋白,利用镍离子亲和树脂纯化后免疫新西兰白兔,制备兔抗Ea1A和ChIL-18多克隆抗体。经间接免疫荧光试验和Western blot证明制备的多克隆抗体均具有良好的反应性。本研究利用一段编码(G4S)3多肽的碱基linker序列将3-1E与Ea1A基因进行连接,成功构建了一个融合基因真核表达载体质粒,即PVAX-3-1E-linker-Ea1A质粒。融合基因质粒体外瞬时转染和体内接种试验表明表达的融合蛋白可以被Ea1A多克隆抗体和3-1E多克隆抗体检测出来,进一步证明了融合基因表达的蛋白具有两段基因各自的生物活性,为后续动物免疫试验提供了理论基础。动物免疫试验分为7个组,即PBS组(PBS对照组)、PVAX组(PVAX空质粒免疫组)、IL-18组(PVAX-IL-18真核质粒免疫组)、3-1E组(PVAX-3-1E真核质粒免疫组)、Ea1A组(PVAX-Ea1A真核质粒免疫组)、LK组(PVAX-3-1E-linker-Ea1A融合基因真核质粒免疫组),以及LK+组(PVAX-3-1E-linker-Ea1A融合基因真核质粒和PVAX-IL-18真核质粒免疫组)。利用淋巴细胞增殖试验、酶联免疫吸附试验、免疫器官指数对不同处理组雏鸡的各项免疫指标进行检测,评价真核表达质粒的免疫效应。结果表明,5组疫苗免疫组各日龄雏鸡的免疫指标均高于组对照组,其中有ChIL-18、LK、LK+三组免疫组免疫应答反应尤为突出。其中T、B淋巴细胞增殖功能、外周血液中抗3-1E和Ea1A特异性抗体水平以及免疫器官指数与对照组相比较都有明显的提高,而且以LK+组最为显著。综上所述,3-1E与Ea1A融合基因真核表达质粒不但能刺激机体的细胞免疫应答,而且能够刺激机体体液免疫应答,ChIL-18基因可以提高3-1E与Ea1A融合基因真核表达质粒刺激机体产生细胞免疫应答和体液免疫应答能力,进而提高机体抵抗球虫攻击的能力。本试验研究为进一步研究ChIL-18的生物学活性提供了试验依据,同时为探讨开发研制新型免疫增强型抗球虫核酸疫苗提供了理论基础。