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目的:研究氯化锰对大鼠生精细胞caspase-3表达的影响,探讨锰对大鼠生精细胞caspase-3表达作用的机理。
方法:雄性SD大鼠(体重120±10g)48只随机分为6组:空白对照组,15mg/kg和30mg/kg MnCl2组。8只/组。15mg/kg MnCl2组和30mg/kg MnCl2组分别染锰(MnCl2·4H2O)4w和6w,空白对照组给予等容NS,给药途径均为腹腔注射,5d/w,1次/d,大鼠分别于第4w末和第6w末处死,取睾丸和血清作以下检测:1.观察睾丸形态学改变和检测精子质量相关指标;2.免疫组化(SABC法)法检测睾丸caspase-3,cytochrome-c,Ki-67表达;3.放射免疫法测定血清T、FSH和LH含量;4.化学比色法测定血清和睾丸LDH活性。
结果:1.锰对大鼠生精功能的影响:与空白对照组比较,染锰4w 30mg/kg MnCl2组睾丸脏器系数显著降低(P<0.01),各染锰组精子数量和精子活动度均显著降低(P<0.01),精子畸形率均显著升高(P<0.01)。染锰剂量相同,染锰6w组与染锰4w组比较,精子数量和精子活动度显著降低(P<0.01),精子畸形率无显著性差异(P>0.05)。染锰时间相同,30mg/kg MnCl2组与15mg/kg MnCl2组比较,精子数量和精子活动度均显著降低(P<0.01),染锰6w,30mg/kg MnCl2组与15mg/kg MnCl2组比较,精子畸形率显著升高(P<0.01)。2.锰对大鼠生精细胞caspase-3表达的影响:与空白对照组比较,各染锰组caspase-3阳性细胞率均显著升高(P<0.01)。染锰剂量相同,染锰6w组与染锰4w组比较,caspase-3阳性细胞率均显著升高(P<0.01)。染锰时间相同,30mg/kg MnCl2组与15mg/kgMnCl2组比较,caspase-3阳性细胞率均显著升高(P<0.01)。3.锰对大鼠生精细胞cytochrome-c表达的影响:与空白对照组比较,各染锰组cytochrome-c阳性细胞率均显著降低(P<0.01)。染锰剂量相同,染锰6w组与染锰4w组比较,cytochrome-C阳性细胞率均显著降低(P<0.01)。染锰时间相同,30mg/kg MnCl2组与15mg/kg MnCl2组比较,cytochrome-c阳性细胞率均显著降低(P<0.01)。各组caspase-3和cytochrome-c阳性细胞率呈显著负相关(r=-0.876,P<0.01)。4.锰对大鼠生精细胞Ki-67表达的影响:与空白对照组比较,各染锰组Ki-67阳性细胞率均显著降低(P<0.01)。染锰剂量相同,15mg/kg MnCl2组染锰6w与染锰4w比较,Ki-67阳性细胞率显著降低(P<0.01)。染锰时间相同,30 mg/kg MnCl2组与15mg/kg MnCl2组比较,Ki-67阳性细胞率显著降低(P<0.01)。各组caspase-3和Ki-67阳性细胞率呈显著负相关(r=-0.798,P<0.01)。5.锰对大鼠血清生殖激素含量的影响:与空白对照组比较,各染锰组T含量显著降低(P<0.01),FSH和LH含量显著升高(P<0.01)。染锰剂量相同,染锰6w组与染锰4w组比较,FSH和LH含量显著升高(P<0.01)。染锰时间相同,30 mg/kg MnCl2组与15mg/kgMnCl2组比较,FSH和LH含量显著升高(P<0.01)。6.锰对大鼠血清和睾丸LDH活性的影响:与空白对照组比较,染锰6w 30mg/kg MnCl2组血清LDH活性显著升高(P<0.01),各染锰组睾丸LDH活性显著降低(P<0.01)。染锰剂量相同,染锰6w组与染锰4w组比较,血清和睾丸LDH活性分别显著升高和降低(P<0.01)。染锰时间相同,染锰6w,30mg/kg MnCl2组与15mg/kg MnCl2组比较,血清LDH活性显著升高(P<0.01),染锰4w和染锰6w,30mg/kg MnCl2组与15mg/kg MnCl2组比较,睾丸LDH活性降低(P<0.05)。
结论:1.染锰15mg/kg4w即可通过线粒体途径诱发大鼠生精细胞caspase-3表达,并且caspase-3的表达随染锰时间和剂量的增加而增加,二者存在一定的时间-效应关系和剂量-效应关系。2.染锰15mg/kg 4w即可抑制大鼠生精细胞Ki-67表达,Ki-67表达随染锰时间和剂量的增加而降低,二者存在一定的时间-效应关系和剂量-效应关系。3.染锰15mg/kg4w即可诱发大鼠血清T含量降低,FSH和LH含量升高,可能是促进生精细胞caspase-3表达的重要原因之一。4.染锰15mg/kg 4w即可诱发大鼠睾丸LDH活性降低和血清LDH活性升高,可能是促进生精细胞easpase-3表达的又一重要原因。