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苹果是主要的经济果树。在苹果的高产优质生产中,病毒病害已经成为制约苹果产业发展的重要因素。在世界范围内苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV）在苹果上检出率最高,为害最严重,地理分布最广的苹果病毒病之一。基于我国对ACLSV的研究现状且对苹果高质安全生产的迫切需求,本文旨在完成以下实验:利用反转录环介导等温扩增（reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP）技术,建立一种简便、快速检测ACLSV的检测方法;以带有ACLSV的辽宁兴城寒富苹果（Malus domestica cultivar Hanfu）为研究材料,采用RT-PCR结合RACE技术,扩增了该ACLSV分离物的全长基因组;构建了ACLSV侵染性克隆载体,为后续开展ACLSV复制、移动,与寄主互做等致病机理研究,改造用于苹果基因功能研究的基因沉默载体奠定基础。具体研究成果如下:1、建立了ACLSV RT-LAMP检测方法,优化的各反应物浓度为:6.0 mM Mg2+、1.2 mM dNTPs、1.0 M Betaine、1.6μM FIP/BIP和0.2μM F3/B3引物,59℃反应60 min;特异性测试中,仅ACLSV检测结果为阳性,对照组均为阴性;灵敏性测试中,此法最低可检测到10-3倍RNA稀释液;随机采取的23株苹果叶片样品RT-PCR阳性检出率为52.2%,RT-LAMP法检测ACLSV,阳性检出率为65.2%,RT-LAMP的检出率高于RT-PCR,表明RT-LAMP具有较高的灵敏性。2、ACLSV XC-HF分离物基因组全长7557个核苷酸（nt）,编码3个ORF,与已经报道的19个ACLSV分离物基因组核苷酸序列的一致性为68.9%84.4%。基于全长基因组序列的系统发育分析证明,Genbank登录的20个ACLSV分离物被划分为6个组,ACLSV XC-HF分离物位于JB组内,与中国梨分离物JB、KMS、YH和中国山楂分离物SY03聚为一支;重组分析结果显示该分离物为一个自然重组产物,重组区域发生在1-338nt。3、通过摩擦接种和木本指示植物双芽嫁接法分别将该分离物接种到草本寄主苋色黎（Chenopodiu mamaranticolor）和木本指示植物俄罗斯苹果（Malus sylvestris cv.R12740-7A）上,该分离物在这两种寄主上分别引起褪绿和皱缩症状。4、本实验成功构建了ACLSV侵染性克隆载体,接种后的西方烟出现了感染ACLSV的症状,叶片黄化褪绿,经凝胶电泳检测ACLSV呈阳性。