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表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是绿茶茶多酚中含量最多,活性最强的儿茶素,具有预防和治疗各种癌症的效果。然而,由于其性质不稳定,容易氧化,生物利用度较低,严重限制了其在实际中的应用。纳米技术可以有效改善生物活性物质的稳定性和生物利用度。本文采用热诱导的方法,将具有抗氧化功能的3-巯基-1-己醇(3MH,一种食品香料添加剂)、EGCG、β-乳球蛋白(β-LG)进行了共组装,获得了性能比较稳定的3MH-EGCG-β-LG纳米粒(MEβ纳米粒)。通过MTT法筛选出了MEp纳米粒相对敏感肿瘤细胞株,运用小鼠急性毒性试验评价了MEp纳米粒的体内安全性,研究了MEp纳米粒的体内外肿瘤抑制作用,并初步阐释了MEp纳米粒体内外肿瘤抑制作用的可能机制。主要结果如下：1.在pH6.5, EGCG和p-LG摩尔比为32：1的条件下,添加适量的食品香料添加剂3MH,热诱导法制备出了3MH-EGCG-β-LG纳米粒(MEβ纳米粒)。3MH与EGCG摩尔比为1:4时所形成的MEβ纳米粒粒径在30 nm左右,体系较为稳定；温度37℃,pH 7.4条件下,具有较好缓释特性；DPPH法检测显示MEp纳米粒具有较好的抗氧化保持特性。在4℃密封避光保存条件下保存6-8 d, MEβ纳米粒无明显变化。2.MTT法筛选表明：人黑色素瘤A375细胞、人肝癌Hep G2细胞和人食管癌TE-1细胞是MEp纳米粒相对敏感的肿瘤细胞株。细胞形态观察和MTT法测试结果显示：60 μgEGCG/mL (3MH: EGCG:β-LG摩尔比为8:32:1)的MEp纳米粒处理肿瘤细胞48h后,人黑色素瘤A375细胞、人肝癌Hep G2细胞和人食管癌TE-1细胞的形态发生了明显改变,存活细胞数显著下降,增殖抑制率明显升高。MEp纳米粒在体外相对EGCG等样品具有较好肿瘤抑制作用。3.小鼠体内急性毒性试验结果表明::MEp纳米粒对小鼠最大给药剂量为100 mg EGCG/kg.BW(一次性尾静脉注射,3MH:EGCG: β-LG摩尔比为8：32:1)。最大给药剂量处理7 d未见有小鼠死亡和异常状况；小鼠体重、脏器指数、血清学指标(天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、肌酐和尿素氮)未见明显改变,脏器组织HE染色未见异常变化。100 mgEGCG/kg.BW的MEp纳米粒对小鼠是安全无毒的。4.以雄性荷瘤(人黑色素瘤A375细胞)裸鼠为肿瘤模型,研究了MEp纳米粒的体内肿瘤抑制作用。试验荷瘤裸鼠每日给予10mg EGCG/kg.BW的MEp纳米粒(3MH:EGCG:β-LG摩尔比为8：32:1),连续尾静脉注射14 d。试验结果显示：MEβ纳米粒在动物体内具有明显的肿瘤抑制作用,体内抑瘤率达51.78%,是同剂量EGCG组2倍,EGCG+β-LG (Eβ)组的约1.5倍。ELISA检测结果显示::MEp纳米粒处理后,荷瘤裸鼠血清中细胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-α的水平明显升高,IL-6水平明显降低。这种细胞因子的变化表明:MEp纳米粒在对荷瘤裸鼠肿瘤抑制过程中,会调节其体内的免疫系统,促进对肿瘤的抑制作用。免疫组化和TUNEL检测结果显示：MEβ纳米粒处理后会使荷瘤裸鼠肿瘤组织中VEGF和PCNA表达量显著下降,细胞凋亡指数和活性Caspase-3表达显著上升。MEp纳米粒在动物体内发挥肿瘤抑制作用可能是通过调节动物的免疫系统,减少肿瘤新生血管的生成,抑制肿瘤细胞增殖,经由Caspase-3介导的细胞凋亡途径而使肿瘤细胞死亡。5.60μg EGCG/mL的MEp纳米粒(3MH:EGCG:β-LG摩尔比为8：32：1)处理肿瘤细胞48 h:DAPI染色,荧光显微镜下观察A375、Hep G2和TE-1三种肿瘤细胞都出现了明显的细胞核染色质高度凝聚、边缘化,形成了凋亡小体。单细胞凝胶电泳试验显示：MEβ纳米粒会使A375、Hep G2和TE-1三种肿瘤细胞的彗星尾部DNA含量和尾矩显著增加,有明显加重三种肿瘤细胞DNA损伤的作用。流式细胞仪对A375、HepG2和TE-1三种肿瘤细胞的细胞周期和凋亡情况检测显示：MEβ纳米粒会使三种肿瘤细胞S期细胞比率显著升高,能诱导三种肿瘤细胞凋亡率显著增加。60μg EGCG/mL的MEp纳米粒能使A375、Hep G2和TE-1三种肿瘤细胞的细胞周期阻滞在S期,明显抑制了三种肿瘤细胞的增殖,诱导其凋亡。6.分光光度法检测A375肿瘤细胞中活性Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达情况,结果显示: MEβ纳米粒作用后,A375肿瘤细胞中活性Caspase-3和Caspase-9吸光度显著增加,其诱使A375细胞凋亡的原因可能是经由内源性线粒体细胞色素释放细胞凋亡途径而使细胞凋亡。7. Western blot法检测MEp纳米粒使A375细胞周期阻滞和凋亡相关信号通路蛋白的表达显示:MEβ纳米粒能显著提升p21蛋白的表达量,下调CyclinE和CDK2的表达量,致使A375肿瘤细胞的细胞周期被阻滞在S期,增殖被抑制。而且,MEp纳米粒能通过抑制磷酸化Akt的表达水平,同时有效增加cleaved caspase-3、 cleaved caspase-9和Bax蛋白的活性,明显降低Bcl-2蛋白的表达量,进而导致A375肿瘤细胞的凋亡。以上结果表明：MEβ纳米粒可诱使A375肿瘤细胞经由线粒体介导的细胞凋亡信号通路而凋亡。