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目的通过观察烙灸疗法对少弱精子症模型大鼠的一般情况、睾丸组织形态学、血清生殖激素、精液指标以及睾丸组织中B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、细胞色素C(Cytochrome C,Cyt C)和半胱天冬酶-3(Cysteinyl aspartate-specific Protease-3,Caspase-3)表达的影响,探讨烙灸疗法对少弱精子症的部分作用机制。方法取72只雄性SD大鼠,体重在210~230 g之间,依据随机数字表法,分为3组,每组24只,分别为烙灸组、模型对照组和空白对照组。烙灸组和模型对照组大鼠用浓度为14 mg/mL的腺嘌呤混悬液灌胃,灌胃量为每100 g体重1.43 mL,1次/d,连续28 d;空白对照组大鼠不予灌胃,照常饲养28 d。灌胃结束后第二天,各组随机抽取2只大鼠行HE染色及精液指标检测,观察是否符合少弱精子症大鼠模型。烙灸组和模型对照组大鼠进行烙灸治疗,2次/周,共8周;空白对照组不予烙灸治疗,继续饲养8周。10%的水合氯醛腹腔注射麻醉,运用心尖采血法采集血液并提取血清,酶联免疫法检测大鼠血清睾酮(Testosterone,T)、卵泡刺激素(Follicle stimulating hormone,FSH)和促黄体生成素(Luteinizing hormone,LH)水平;摘取附睾并采集精液,计算机辅助精子分析仪(Computer-aided semen analysis,CASA)检测大鼠的精子浓度、总活力和前向运动百分率;摘取双侧睾丸组织,HE染色后光学显微镜下观察睾丸组织形态学变化并计算生精小管直径;免疫组织化学法和Western blot印迹法检测大鼠睾丸组织Bcl-2、Cyt C和Caspase-3蛋白的表达水平,最后运用SPSS 17.0统计软件包分析数据。结果1.一般情况:模型对照组和烙灸组大鼠腺嘌呤灌胃后,大鼠精神状态欠佳,反应能力下降,饮食数量呈现下降趋势,尿量增加、大便质软清稀,喜蜷缩,尾巴从红润有光泽逐渐变苍白,体重增长缓慢。空白对照组大鼠反应灵敏,饮食及饮水量正常,体重呈逐渐增长趋势,大便质地坚硬,尾巴颜色红润有光泽;烙灸疗法治疗后,与模型对照组比较,烙灸组大鼠的反应能力、饮食数量、大便质地都有所好转,尿量逐渐减少,尾巴颜色略微变红润,体重亦有所增加。2.精液指标:模型对照组和烙灸组大鼠精液指标(精子浓度、总活力、前向运动百分率)均低于空白对照组(P<0.05)。烙灸组大鼠精液指标(精子浓度、总活力、前向运动百分率)高于模型对照组(P<0.05)。生精小管直径结果:与空白对照组相比,其余两组生精小管直径均减小(P<0.05);与模型对照组相比,烙灸组生精小管直径增大(P<0.05)。3.组织形态学观察:光学显微镜下可见:空白对照组清晰可见睾丸组织内结构,生精上皮无缺损,生精细胞及精子的排列整齐;模型对照组:大鼠生精小管明显萎缩,生精细胞数量减少;烙灸组:大鼠生精小管内生精细胞数量较模型对照组明显增多,细胞排列较整齐。4.血清生殖激素检测:与空白对照组相比,其余两组大鼠血清T降低(P<0.05);烙灸组大鼠血清T高于模型对照组(P<0.05)。与空白对照组比较,其余两组大鼠血清LH升高(P<0.05);烙灸组大鼠血清LH低于模型对照组(P<0.05)。与空白对照组比较,其余两组血清的FSH升高(P<0.05);烙灸组大鼠血清FSH低于模型对照组(P<0.05)。5.睾丸组织Bcl-2、CytC和Caspase-3的表达(免疫组化法):Bcl-2蛋白表达:与空白对照组比较,其余两组大鼠睾丸组织Bcl-2的表达降低;烙灸组大鼠睾丸组织Bcl-2的表达高于模型对照组。CytC蛋白表达:与空白对照组比较,其余两组大鼠睾丸组织Cyt C的表达升高(P<0.05);烙灸组大鼠睾丸组织Cyt C的表达低于模型对照组;Caspase-3蛋白表达:与空白对照组比较,其余两组大鼠睾丸组织Caspase-3蛋白表达水平增高(P<0.05);烙灸组Caspase-3的表达低于模型对照组(P<0.05)。6.睾丸组织Bcl-2、CytC和Caspase-3的表达(Western blot法):Bcl-2蛋白表达:与空白对照组比较,其余两组大鼠睾丸组织Bcl-2的表达降低;烙灸组大鼠睾丸组织Bcl-2的表达高于模型对照组。Cyt C蛋白表达:与空白对照组比较,其余两组大鼠睾丸组织Cyt C的表达升高(P<0.05);烙灸组大鼠睾丸组织中Cyt C的表达低于模型对照组;Caspase-3蛋白表达:与空白对照组比较,其余两组大鼠睾丸组织Caspase-3蛋白表达水平增高(P<0.05);烙灸组Caspase-3的表达低于模型对照组(P<0.05)。结论1.烙灸疗法可能是通过增加Bcl-2的表达、抑制Cyt C和Caspase-3的表达起到治疗少弱精子症的作用。2.烙灸疗法可以改善少弱精子症大鼠的精子活力。