【摘 要】
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同化激素是一类具有强的蛋白质同化作用,可抑制异化或氧化代谢,提高蛋白质沉积的甾体类物质,具有重要的残留毒理学意义。其中,滥用于畜禽养殖业中最普遍的主要有睾酮、甲基睾酮、黄体酮、群勃龙、勃地龙、诺龙、美雄酮、康力龙、丙酸诺龙、丙酸睾酮及苯丙酸诺龙等。农业部发布的第250号公告明确指示不得在食品动物中添加甲基睾酮、群勃龙等药物。但目前非法将这类药物用于畜禽、水产养殖上的报道仍时有发生。本研究建立了超高
【基金项目】
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农业部制标项目(编号:181721301092371);
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同化激素是一类具有强的蛋白质同化作用,可抑制异化或氧化代谢,提高蛋白质沉积的甾体类物质,具有重要的残留毒理学意义。其中,滥用于畜禽养殖业中最普遍的主要有睾酮、甲基睾酮、黄体酮、群勃龙、勃地龙、诺龙、美雄酮、康力龙、丙酸诺龙、丙酸睾酮及苯丙酸诺龙等。农业部发布的第250号公告明确指示不得在食品动物中添加甲基睾酮、群勃龙等药物。但目前非法将这类药物用于畜禽、水产养殖上的报道仍时有发生。本研究建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测猪鸡可食性组织(肌肉、肾脏、肝脏、鸡蛋)中11种同化激素残留量的方法,以期为动物源性食品中同化激素残留提供检测技术。由于组织样品与鸡蛋成分组成上存在很大不同,因此采用两种方法进行样品前处理。动物组织样品肌肉、肝脏与肾脏中的同化激素用10 m L甲醇-乙腈(1:1,v/v)溶液提取,置于-20℃下,冷冻2 h,以12000 r/min,离心10 min,将提取的上清液于37℃水浴旋转蒸至近干,加4 m L 25%乙腈水溶解,将离心后的复溶液加到C18固相萃取柱净化,加入4 m L乙腈洗脱,于37℃水浴下氮气吹干,加入1 m L30%乙腈水(30:70,v/v)复溶,涡旋2 min,上清液过0.22μm滤膜,采用UPLC-MS/MS进行分析检测,0.1%甲酸水与0.1%甲酸乙腈作为流动相,梯度洗脱。鸡蛋用10 m L甲醇-乙腈(80:20,v/v)提取,氮气吹干后,0.1%甲酸-30%乙腈水(30:70,v/v)复溶,其他步骤与猪、鸡组织前处理方法相同。在本实验方法中,测得猪肌肉、肝脏、肾脏组织中11种同化激素的检测限分别为0.1~0.5μg/kg、0.2~1.0μg/kg、0.1~0.5μg/kg;鸡肌肉、肝脏、肾脏组织中11种同化激素的检测限分别为0.1~0.5μg/kg、0.1~1.0μg/kg、0.1~0.5μg/kg;鸡蛋中的检测限为0.1~0.5μg/kg。测得猪肌肉、肝脏、肾脏组织中11种同化激素的定量限分别为0.3~1.0μg/kg、0.6~3.0μg/kg、0.3~1.5μg/kg;鸡肌肉、肝脏、肾脏组织中11种同化激素的定量限分别为0.3~1.0μg/kg、0.3~3.0μg/kg、0.4~1.5μg/kg;鸡蛋中11种同化激素的定量限为0.4~1.5μg/kg。11种同化激素在猪肌肉、肝脏、肾脏组织中浓度线性范围分别为1~100μg/kg,3~150μg/kg,1.5~100μg/kg,相关系数大于0.99,线性关系良好;在鸡肌肉、肝脏、肾脏组织及鸡蛋中的浓度线性范围分别为1~100μg/kg,3~150μg/kg,1.5~100μg/kg,1.5~100μg/kg,相关系数大于0.99,线性关系良好。在猪与鸡的肌肉、肾脏、肝脏及鸡蛋中分别添加10μg/kg、20μg/kg、50μg/kg三个浓度进行添加回收试验。测得11种同化激素在猪肌肉、肝脏、肾脏中批内平均回收率依次为74.3%~101.1%,70.8%~100.1%,70.5%~99.8%;批内变异系数依次为2.4%~14.1%,1.1%~7.9%,0.9%~6.1%;批间变异系数依次为6.0%~13.7%,2.2%~13.5%,3.4%~12.6%。测得11种同化激素在鸡肌肉、肝脏、肾脏及鸡蛋中批内平均回收率依次为70.1%~97.4%,73.5%~102.3%,72.4%~98.0%,72.7%~97.0%;批内变异系数依次为1.4%~13.0%,0.8%~6.8%,2.6%~7.1%,2.4%~8.9%;批间变异系数依次为5.0%~12.3%,2.1%~9.1%,2.1%~9.7%,2.6%~8.6%。实验结果表明,本研究建立的UPLC-MS/MS检测猪鸡可食性组织中11种同化激素残留量的方法操作简单、灵敏度高、重现性好,符合兽药残留分析的要求。
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