宽叶雀稗再生体系建立与耐盐突变体筛选研究

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宽叶雀稗(Paspalum wettsteinii Hack.)是雀稗属(Paspalum)的一种常见草坪草,在草坪建植绿化、荒地护坡与饲用价值等方面被广泛利用,但是目前并无学者对其离体培养和新品种培育进行相关研究。为满足草坪市场和高质量新品种的需求,本研究成功构建宽叶雀稗再生体系并初步获得耐盐新品种植株。本文首先分别进行野生型宽叶雀稗种子耐盐试萌发和植株耐盐生长试验,判断该草种耐盐性;其次以种子为外植体材料,成功构建宽叶雀稗完整再生体系,获得各阶段最佳培养基方案与技术方法,并为后续研究提供材料和技术支持;以宽叶雀稗无性系愈伤组织为材料,通过体细胞无性系变异,成功筛选出耐盐突变体愈伤组织,初步获得耐盐突变体植株;最后将突变体植株与野生型植株、普通再生植株进行耐盐性评价,耐盐突变体植株耐盐性显著高于(P<0.05)其他植株。本试验为今后开展宽叶雀稗耐盐新品种选育提供参考,主要研究结果如下:1.宽叶雀稗种子萌发率随盐浓度增加呈现先增后减趋势,低浓度的盐离子有利于种子萌发和萌发苗生长,分别以种子萌发率和植株存活率为指标,建立回归方程确定种子耐盐萌发致死浓度305.75 mM;野生型宽叶雀稗植株在不同盐浓度下生长,叶色分值与枯黄率呈现负相关(-0.923**),且还存在极显著差异(P<0.001),在295.04 mM盐浓度时,植株完全枯死。2.宽叶雀稗种子外植体组培体系:种子加0.8%NaCIO(50 ml)震荡(24h,24℃,140 r/min),无菌水冲洗34次(15秒/次),最后加50 ml无菌水封闭浸泡12 h;愈伤组织最佳诱导培养基:MS+4.0mg/L2,4-D;最佳增殖培养基:MS+4.0mg/L2,4-D;最佳分化培养基:MS+2.0 mg/L6-BA+0.5 mg/LNAA;最佳生根培养基:1/2MS+2.0 mg/LNAA+0.2 mg/L6-BA;分化苗练苗3d后移栽,移栽存活率高。3.耐盐突变体筛选:获取普通愈伤组织耐盐增殖临界浓度为294.00 mM;以294 mM作为筛选培养基的选择盐浓度,利用体细胞无性系变异方法,用大量普通愈伤组织选择出两颗质量较好的耐盐突变体愈伤组织,筛选比例为5000:2,初步获得耐盐突变体再生植株。4.耐盐突变体评价:以野生型植株和普通愈伤组织获得的植株为对照,利用土培与水培方式分别对突变体植株进行耐盐(294.00 mM)鉴定表明,超过80%突变体植株在叶色、坪用价值和枯黄率都极显著(P<0.001)优于对照组,初步获取突变体植株。
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