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蜡梅(ChimonanthuspraecoxL.)为我国传统名花,是蜡梅科蜡梅属落叶丛生灌木。花香馥郁,开于百花寂寥的冬季,香气特征作为重要性状,在切花、园林种植中广泛应用。本文以芳香的H29和无香的SW001品系蜡梅作为研究材料,测定4个时期挥发物成分。筛选转录组库萜类差异表达基因CpTPS5、CpTPS16,通过实时定量表达分析,结合挥发物种类及释放量差异,寻找基因表达与花香释放之间的联系。构建双元表达载体,在烟草中超量表达CpTPS5、CpTPS16,利用GC-MS对香气成分定性及定量分析,初步探究萜烯合成酶功能。1、H29和SW001蜡梅品系共鉴定出64种香气成分,萜类、苯环型化合物占据主导地位。H29盛花期单位时间内挥发物质总量为3449.48ng/g,含量较高的物质分别为:芳樟醇、乙酸苄酯、水杨酸甲酯。SW001同期挥发物总量为9886.26ng/g,含量较高的物质分别为:反式-β罗勒烯、(1S,2S,3R,5S)-(+)-2,3-蒎烷二醇、2,6-二甲基-1,3,5,7-辛四烯、甜桦油、苯甲酸甲酯。2、对2品系4个时期花香成分测定,H29萜类总含量露瓣期至末花期,逐渐增加。单萜含量变化一致;倍半萜最高含量86.57ng/g出现于露瓣期,随后降低,末花期有所回升。SW001萜类总含量变化趋势呈先增后减,单萜挥发物释放与之一致;倍半萜挥发物含量露瓣期高于初开期,于盛花期达到顶峰,为44.46ng/g,末花期降低。3、经蛋白序列比对,CpTPS5、CpTPS16在H29和SW0012品系中无差异;构建系统进化树,CpTPS5与TPSa倍半萜合酶家族聚类到一起,与石竹烯较为相近;CpTPS16同TPSb单萜合酶萜家族聚类到一起。4、实时定量PCR结果显示:CpTPS5基因在H29中上调表达,表达先增加后减少,盛花期表达量是同期SW001品系13倍;CpTPS16基因在SW001中上调表达,在4时期中显著高于基因在H29品系表达量。2品系中表达趋势相同,由露瓣期至末花期持续增加。5、烟草中超量表达CpTPS5、CpTPS16,由挥发物成分测定及定量计算分析可得:萜类成分中单萜、倍半萜物质释放量呈现规律性,转基因植株与野生型挥发物种类无显著差异,但挥发性萜类远超于野生型中萜类释放量。绝对定量计算石竹烯、芳樟醇、柠檬烯、萘?、己酸甲酯5种挥发性物质,发现在转CpTPS16基因中上述萜类物质释放量约为CpTPS5中2倍,且显著高于其在野生型、空载中的释放量,而链状酯类己酸甲酯在CpTPS5、CpTPS16释放量基本持平,无明显差异。