PI3K信号通路对GES-1、BGC-823细胞系中磷酸化P27蛋白表达和分布的影响

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目的:1、研究P27蛋白及三种磷酸化P27蛋白(p-P27(Thr187)、p-P27(Thr157)、p-P27 (Serl0))在GES-1、BGC-823两细胞系的表达及分布差异。2、研究P13K信号通路在GES-1、BGC-823细胞系中对P27蛋白、p-P27 (Thr187)、p-P27 (Thr157)、p-P27 (Ser10)的表达及分布的影响。方法:培养人胃黏膜上皮永生化细胞系GES-1及人胃癌细胞系BGC-823,以流式细胞术测定各自的细胞周期分布。以Western blotting测定两种细胞总蛋白、浆蛋白、核蛋白中P27及p-P27 (Thr187)、p-P27 (Thr157)、p-P27 (Ser10)的含量及分布特点。以PI3K信号通路特异性阻滞剂LY294002处理两种细胞系,再以流式细胞术测定细胞周期,Western blotting测定目的蛋白在细胞总蛋白及核、浆中的表达及分布。所得结果输入SPSS13.0统计软件进行分析。结果:1、对比GES-1、BGC-823两细胞系,在细胞总蛋白中,P27蛋白、p-P27(Thr187)、p-P27 (Thr157)、p-P27 (Ser10)的表达均有统计学差异(P=0.000;P=0.000;P=0.000;P=0.000)。在细胞浆蛋白中,P27蛋白、p-P27 (Thr157)、p-P27 (Ser10)表达的差异有统计学意义(P=0.001; P=0.000; P=0.000),而p-P27(Thr187)表达无统计学意义(P=0.052)。在细胞核蛋白中,P27蛋白、p-P27(Thr187)、p-P27 (Ser10)表达的差异有统计学意义(P=0.001;P=0.000;P=0.000),而p-P27 (Thr157)表达无统计学意义(P=0.288)。两细胞系周期分布差异明显(P=0.003)。2、GES-1细胞系经LY294002作用后,在细胞总蛋白中,P27蛋白及p-P27(Thr187)、p-P27 (Thr157)、p-P27 (Ser10)的表达量变化均无统计学意义(P=0.651; P=0.482; P=0.357; P=0.070)。在细胞浆蛋白中,p-P27(Thr187)、p-P27 (Ser10)表达量变化无统计学意义(P=0.053;P=0.056),而P27蛋白和p-P27 (Thr157)表达量则变化显著(P=0.013;P=0.002)。在细胞核蛋白中,P27蛋白及p-P27 (Thr187)、p-P27 (Thr157)、p-P27 (Ser10)表达量均无统计学差异(P=0.558; P=0.140; P=0.223; P=0.052)。给予处理前后细胞周期变化无统计学意义(P=0.392)。3、BGC-823细胞系经LY294002作用后,在细胞总蛋白中,P27蛋白、p-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)表达量均变化显著,差别有统计学意义(P=0.000;P=0.001;P=0.000),而p-P27 (Thr187)表达量无统计学变化(P=0.254)。在细胞浆蛋白中,P27蛋白、p-P27 (Thr157)、p-P27 (Ser10)表达量变化显著(P=0.000; P=0.000; P=0.001),而p-P27 (Thr187)表达量无明显变化(P=0.070)。在细胞核蛋白中,P27蛋白、p-P27 (Ser10)表达量变化显著(P=0.001; P=0.001),而p-P27 (Thr187), p-P27 (Thr157)表达量无明显变化(P=0.223;P=0.482)。给予处理前后细胞周期变化显著(P=0.001)。4、两细胞系同时经LY294002作用后,在细胞总蛋白中P27蛋白、p-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)的表达无统计学差异(P=0.391;P=0.158;P=0.106),仅p-P27 (Thr187)表达差别显著(P=0.000)。在细胞浆蛋白中,P27蛋白、p-P27 (Thr157). p-P27 (Ser10)的表达无统计学差异(P=0.279;P=0.062;P=0.196),仅p-P27 (Thr187)表达差别显著(P=0.002)。在细胞核蛋白中,P27蛋白、p-P27 (Thr157)、p-P27 (Ser10)的表达无统计学差异(P=0.092;p=0.081; P=0.055),仅p-P27 (Thr187)表达差别显著(P=0.000)。两组细胞的周期分布无统计学差异(P=0.564)。结论:1、P27蛋白及磷酸化P27蛋白在GES-1细胞系和BGC-823细胞系中的表达水平和核浆分布规律不同。2、阻断PI3K信号通路对GES-1细胞系中P27蛋白及磷酸化P27蛋白的表达水平和核浆分布影响不大,也不会对其细胞周期产生扰乱。3、阻断PI3K信号通路可增加BGC-823细胞系中P27蛋白表达量,减低磷酸化P27蛋白的表达量,并可影响细胞周期的分布,使其接近正常细胞。4、PI3K信号通路主要通过改变P27蛋白的核浆分布,促进其在胞浆定位而抑制它的抗肿瘤作用,与P27蛋白的水解关系不大。5、通过阻断PI3K信号通路而引起胃癌细胞周期的改变,是治疗胃癌的一条新途径,具有广阔的应用前景。
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