论文部分内容阅读
目的:研究microRNA-183(miR-183)在人肝癌HepG 2细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭中的作用,并探讨对早期生长反应因子1(EGR-1)、酪氨酸激酶6(PTK6)表达的影响,为肝癌的靶向治疗提供实验依据。方法:常规培养肝癌HepG2细胞株,采用脂质体转染法干扰HepG2细胞的miR-183表达。实验分三组:Control组(不转染任何序列),Negative Control(NC)组(转染阴性对照序列)和mi R-183 inhibitor组(转染miR-183 inhibitor)。MTT法检测HepG2细胞的增殖;流式细胞仪测定细胞凋亡能力;划痕愈合实验观察各组HepG2细胞的横向迁移能力;HepG2细胞的纵向迁移和侵袭能力通过Transwell迁移和侵袭实验检测;实时荧光定量PCR技术检测转染后各组HepG2细胞中miR-183、EGR-1和PTK6基因的表达;各组HepG2细胞的EGR-1和PTK6蛋白水平通过蛋白免疫印迹法检测。生物信息学软件预测miR-183与EGR-1的靶向调控关系。结果:脂质体转染结果显示,miR-183 inhibitor组HepG2细胞的miR-183水平明显低于Control组和NC组(P<0.01)。MTT实验结果表明,转染miR-183 inhibitor后HepG2细胞增殖率明显比Control组和NC组的增殖率降低(P<0.01)。流式细胞术结果显示,miR-183 inhibitor组HepG2细胞的凋亡率明显高于Control组和NC组(P<0.01)。划痕检测结果发现,miR-183 inhibitor组HepG2细胞的划痕愈合率明显低于Control组和NC组(P<0.01)。Transwell实验结果发现,miR-183 inhibitor组的穿膜细胞数比Control组和NC组的穿膜细胞数明显减少(P<0.01)。实时荧光定量PCR的结果显示,转染miR-183 inhibitor组HepG2细胞中EGR-1 m RNA水平明显高于Control组和NC组(P<0.01),而PTK6 mRNA明显降低于Control组和NC组(P<0.01)。蛋白免疫印迹结果发现,miR-183 inhibitor组HepG2细胞中EGR-1蛋白的表达量明显升高(P<0.01),PTK6蛋白的表达量明显降低(P<0.01)。生物信息学软件分析结果显示miR-183靶向调节EGR-1基因。结论:⑴miR-183促进人肝癌HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制凋亡。⑵在HepG2细胞中,EGR-1是miR-183潜在的靶基因。⑶在HepG2细胞中,miR-183间接影响PTK6的表达。