斑马鱼补体调节因子CFI基因的鉴定、功能初探及CFH家族成员的急相反应

来源 :中国海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lihai_feng
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
补体调节因子I(CFI)是哺乳动物补体系统的重要组成成分,发挥着免疫调节的作用,在辅因子C4bp、MCP和CFH的作用下通过酶解C3b和C4b分子调节补体系统的过度激活。已有研究表明哺乳动物中CFI有重要作用,且与疾病发生相关,但CFI在其它物种中研究较少。斑马鱼作为一种重要的模式动物,其基因组测序已经完成,与人类基因的保守性高达85%,这使得斑马鱼适于研究基因的表达与功能。本论文成功从斑马鱼中克隆了补体因子CFI,并分析了其特征、表达,对功能进行了初步探索,同时对CFI的辅因子CFH在胚胎发育中的表达模式及其对LPS和LTA感染的应答进行了分析。斑马鱼CFI mRNA全长为2384bp,其中编码区为2193bp,编码含731个氨基酸的蛋白质,多肽链的分子量为81.4kDa,等电点pI为6.17。与其它脊椎动物CFI蛋白的同源比对结果显示序列相似性高达35.5%-67.1%,且序列中存在大量保守的半胱氨酸。CFI蛋白具有一段由18个氨基酸组成的信号肽和5个保守域,即FIMAC、SRCR、LDLr1、LDLr2和SP结构域。在信号肽与FIMAC结构域之间还有一段特异性的序列,这段序列可能是鱼类所特有的。成熟的CFI是由重链和轻链组成的异质二聚体,FIMAC、SRCR、LDLr1和LDLr2组成重链,SP结构域组成轻链,在轻链中存在保守的催化三联体His-Asp-Ser和一个位于催化部位底部的Asp残基。作为一种分泌型糖蛋白,斑马鱼的CFI序列中含有O-糖基化位点和N-糖基化位点,O-糖基化位点主要位于信号肽和FIMAC结构域之间的特异性序列区域,N-糖基化位点则分散存在于整个CFI序列之中。蛋白结构预测显示斑马鱼CFI蛋白同人CFI蛋白的空间结构具有很高的相似性,这预示它们功能上的相似性。进化分析显示,CFI蛋白在进化上高度保守,哺乳动物CFI基因聚为一枝,斑马鱼与硬骨鱼的CFI蛋白聚为一枝。LDLr1结构域和LDLr2结构域的进化树中两个结构域各聚为一簇,在每一个结构域的分枝中表现出与CFI蛋白全长进化树相同的聚类趋势。实时定量PCR检测结果显示斑马鱼CFI基因在各组织中广泛表达,其中在卵巢、精巢、肝脏、脑、肠和眼中的表达量很高。当受到LPS感染时,CFI在肝脏中的表达量上调。CFI基因和CFH家族基因在不同发育时期胚胎中具有不同的表达模式,CFI基因在胚胎发育的体节期表达量最多,而大部分CFH家族成员在1dpf胚胎中表达量开始显著增多,其中CFHL4在胚胎发育整个过程中都具有很高的表达量。在体节期,当胚胎受到LPS和LTA感染时,CFI基因的表达量显著下调,而CFH家族基因在胚胎发育不同时期则呈现不同的应答趋势,且表达量变化显著。推测CFH家族基因在斑马鱼胚胎发育过程中,通过多种形式对补体途径进行着精确的调控。胚胎整体原位杂交结果显示,CFI基因在胚胎发育的过程中在卵黄合胞体上一直具有特异性表达,在体节期时信号最强。当胚胎发育至1天时,CFI基因在松果体中也出现特异性表达。这提示CFI除了参与补体调节外,可能在早期发育过程中也起重要作用。初步实验表明过表达CFI mRNA并没有可见的对胚胎发育的影响。同时,还尝试了原核表达CFI,体外诱导表达重组蛋白CFI的大小为64.2kDa,这为进一步在蛋白水平研究斑马鱼CFI的功能奠定了基础。
其他文献
目的探讨语言认知康复系统在脑瘫儿童语言康复中的应用效果。方法选取焦作市妇幼保健院收治的84例脑瘫儿童作为研究对象,随机分为康复组和对照组,各42例,对照组患儿进行传统
<正>当今社会,人们的生活、学习、工作方式逐渐被现代信息技术所改变,多媒体教学是信息技术在教育领域内的最直接体现。要培养适应高速发展的信息时代的合格人才,应用先进的
介绍了床垫的产品标准和主要质量标准,从铺垫料、阻燃性、甲醛释放量和抑螨性能方面对床垫产品存在的质量环保问题进行深入的分析,并为消费者选择床垫产品提出了建议。
目的观察腹腔灌注联合子宫输卵管内注射给药和单一输卵管内注射给药治疗输卵管性不孕症的疗效。方法随机选取2013年1月至2013年12月于开封市医学科学研究所生殖中心就诊的200
目的探讨黛力新联合心理干预治疗冠心病伴焦虑抑郁症患者的临床效果。方法将96例冠心病伴焦虑抑郁患者随机分为对照组与观察组,各48例,均给予冠心病二级预防常规治疗及心理干
本文重点阐述团状模塑料 (BMC)用不饱和聚酯树脂采用聚氨酯增韧改性的研究进展 ,并探讨了增韧机理。
留白是绘本常见的表现手段,通过图画和文字留白,延伸了绘本的审美想象,拓宽了儿童与绘本对话的空间。"绘本个性读写"就是以"个性"为核心、以"绘本"为载体,把自己独特的阅读体
目的:研究雌激素对三阴乳腺癌细胞恶性生物学行为的调节作用及其分子机制。方法:培养三阴乳腺癌细胞株MDA-MB-468,用不同剂量的雌激素以及10~6mol/L雌激素联合GPR30拮抗剂G15
<正>试卷讲评是语文教学中的一个重要环节,但纵观初中语文试卷讲评课,有很多不尽如人意之处。教师要么只是在课堂上简单地给学生公布考试分数,要么只是纯粹地给学生念答案抄