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禽流感(avian influenza, AI)又称真性鸡瘟、欧洲鸡瘟,是由A型流感病毒引起的一种禽类烈性传染病。自禽流感流行以来,给世界许多国家和地区的养禽业带来了巨大的经济损失,是危害养禽业的主要疫病之一,并被世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health, OIE)和世界贸易组织(World Trade Organization, WTO)列为A类疾病。禽流感病毒属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)A型流感病毒属(Influenza A virus genus),病毒基因组由8个单股负链RNA组成,可编码十种蛋白(HA、NA、NP、M1、M2、PB1、PB2、PA、NS1和NS2)。A型流感病毒的核衣壳和基质蛋白具有相似的抗原性,但根据血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的抗原性的不同,可分为16个H亚型(H1-H16)和10个N亚型(N1～N10)。此病一旦发生,病死率极高,在我国及国外一些国家主要采用接种禽流感疫苗来预防其暴发与流行。本实验通过细胞蚀斑纯化技术结合SPF鸡胚极限稀释法对RE-4疫苗毒进行纯化筛选,选择出斑时间较早、独立并且数量占优的蚀斑进行连续纯化,四代纯化后接种SPF鸡胚通过极限稀释法选择稀释度大且血凝效价高的尿囊液继续传代接种纯化,传至第四代时EID50、HA效价都趋于稳定,相对于原毒株血凝效价(HA)从9Log2提高到10log2,鸡胚半数感染量(EID50)从10-7.9/0.1mL提高到10-8.5/0.1mL且连续传代均较稳定。最终得到血凝效价高、病毒含量高且稳定的疫苗用生产种毒。用该纯化株疫苗毒制备油乳剂灭活苗,经半成品成品无菌检验、安全性试验及免疫后抗体HI测定表明纯化筛选的疫苗株所制疫苗安全性好、免疫保护效力强,符合《国家兽用生物制品规程》的要求。