多杀菌素（spinosad）是由土壤放线菌刺糖多孢菌（Saccharopolyspora spinosa）经有氧发酵产生的大环内酯类化合物,在功能上具有极好的杀虫活性,是一种理想的绿色生物杀虫剂。但是,野生型刺糖多孢菌合成多杀菌素的能力相对较弱且发酵周期长,限制了多杀菌素的工业生产和使用。至今,对多杀菌素生物合成途径的限速步骤及相关的代谢调控基因知之甚少,探索不同调控基因在刺糖多孢菌中的结构和表达调控,可以为运用基因工程手段对多杀菌素生产菌株定向遗传改造提供基础,有望为提高多杀菌素产量找到新的突破途径。聚糖去乙酰化酶（polysaccharide deacetylase,PSDA）首次发现于枯草芽胞杆菌中,具有调节细菌细胞壁的形成、影响芽胞萌发的功能。刺糖多孢菌的蛋白质组学研究发现,聚糖去乙酰化酶的表达与次级代谢产物多杀菌素的合成具有相关性。本研究PCR扩增了psda基因部分片段,将其克隆到大肠杆菌-链霉菌穿梭载体p OJ260上,构建阻断型载体p OJ260-psda。通过接合转移将其导入刺糖多孢菌中,获得刺糖多孢菌psda基因突变菌株S.spinosa-△psda。将突变菌株接种至不同培养基,观察菌株的菌落形态及孢子形成情况,发现突变菌株的孢子形成明显延迟。摇瓶发酵结果显示HPLC分析水平上检测不到突变菌株多杀菌素的产量。psda基因对刺糖多孢菌的生长发育有一定的影响,并对调控多杀菌素的生物合成具有重要作用。BldD蛋白是链霉菌中的全局性调控因子,调节菌体的形态分化与次级代谢产物的合成。本研究采用重叠延伸PCR将bldD基因置于红霉素强启动子(P_{erm E})的控制下克隆至大肠杆菌-链霉菌穿梭载体p UC-spn上,构建重组载体p UC-spn-P_{erm E}-bldD。通过接合转移将其导入刺糖多孢菌中,获得遗传性能稳定的重组菌株S.spinosa-BldD。PCR检测结果显示,bldD基因已成功整合到目标菌株染色体上。平板培养观察发现,在BHI和TSB平板上,重组菌株的孢子形成受到明显抑制。摇瓶发酵结果显示,与对照菌株相比,重组菌株多杀菌素产量提高了1.35倍。bldD基因的过量表达在一定程度上抑制刺糖多孢菌的孢子形成,并有效地促进多杀菌素在刺糖多孢菌中的生物合成。本研究首次从刺糖多孢菌中克隆了两个潜在的调控基因psda和bldD,初步研究其对刺糖多孢菌生长发育和多杀菌素合成的影响,为研究多杀菌素生物合成代谢调控网络奠定了一定的基础。