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目的：通过对鼻咽癌CNE-2z细胞株不同处理,观察其凋亡及EGFR信号通路蛋白表达的变化,初步探索C225对鼻咽癌的放疗增敏作用及其可能的相关机制。
方法：
1鼻咽癌CNE.2Z细胞株的EGFR表达和C225在体外细胞试验中工作浓度的测定
1.1免疫细胞化学法和Western blot法测鼻咽癌CNE-2Z细胞株EGFR的蛋白表达情况
1.2 MTT法测定C225在体外细胞试验中工作浓度
2 C225对鼻咽癌CNE-2Z细胞株放射敏感性的影响
2.1体外培养克隆形成实验观察鼻咽癌CNE-2Z细胞株的存活分数
2.2 Annexin.V/PI双染法观察鼻咽癌CNE-2Z细胞株凋亡的变化
2.3 Western blot法观察鼻咽癌CNE-2Z细胞株EGFR和pAkt蛋白表达的变化
结果：
1.1免疫细胞化学法和Western blot法测鼻咽癌CNE-2Z细胞株EGFR的表达
免疫细胞化学法和Wlestern blot法检测发现CNE-2Z细胞株EGFR呈高表达水平。
1.2MTT法测C225工作浓度的结果
生长抑制率(IC)=(对照组OD值-实验组OD值)/对照组OD值×100％,IC50时对应的C225浓度约为25ug/mL,取其1/5即5ug/mL为C225在体外细胞试验中的工作浓度。
2.1体外培养克隆形成实验观察CNE-2Z细胞株的存活分数
C225联合放疗组每个剂量点细胞的存活分数明显低于单纯放疗组,计算得C225联合放疗的两组SF2分别为(0.5001±0.0324)%和(0.5032±0.0258)%,显著低于单纯放疗组SF2(0.7894±0.0201)%。
2.2 Annexin V/PI双染法观察鼻咽癌CNE-2Z细胞株凋亡的变化
放疗前用药组的细胞凋亡率为(31.1±0.24)%,放疗后用药组的细胞凋亡率为(32.84±0.13)%,单纯放疗组的细胞凋亡率为(12.5±0.60)%,单纯用药组的细胞凋亡率为(6.8±0.95)%,未处理组的细胞凋亡率为(2.84±0.51)%,放疗联合用药组的细胞凋亡率明显高于单纯处理组和未处理组(P＜0.05,n=3)。
2.3 Western blot法观察鼻咽癌CNE-2Z细胞株EGFR和pAkt蛋白表达的变化
单用C225组EGFR和pAkt蛋白表达较对照组明显下降;与单纯放疗组比较,C225联合放疗组的EGFR和pAkt蛋白表达明显下降;单纯放疗组的EGFR和pAkt蛋白表达较对照组有所升高。
结论：
C225具有放疗增敏作用,其机制涉及到C225联合放疗增强了单纯放疗诱导的细胞凋亡;并且推测其凋亡增加可能与C225抑制EGFR的表达和功能,进而抑制EGFR-P13K-Akt信号转导通路有关。