荧光金纳米团簇用于病毒成像分析及抗病毒研究

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荧光金纳米团簇(Au NCs)因其亚纳米级尺寸表现出独特的光电化学性质,如光稳定性好、双光子吸收截面积大和良好的生物相容性等优点,在离子检测、生物分子检测、细胞成像、活体诊断和抗肿瘤方面都有研究报道,然而AuNCs对病毒的影响鲜有报道。本论文探究不同修饰剂的AuNCs对猪伪狂犬病毒(PRV)及猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(PRRSV)的影响,并将其进行细胞成像研究。1.以谷胱甘肽(GSH)为修饰剂合成水溶性的荧光GSH-AuNCs,采用荧光光谱(FL)、紫外光谱(UV)、水合粒径(DLS)、透射电子显微镜(TEM)、傅里叶变换红外光谱(FT-IR)和X-射线光电子能谱(XPS)对GSH-Au NCs进行表征,用MTT法评估了GSH-Au NCs在非洲绿猴肾传代细胞(MARC-145)和猪肾传代细胞系(PK-15)的细胞毒性,结果表明:GSH-Au NCs具有良好的光稳定性,当其浓度小于450 μmol/L时,PK-15和MARC-145细胞的存活率大于80%。将GSH-Au NCs应用于PRV入侵PK-15细胞和PRRSV入侵MARC-145细胞的影响研究,通过空斑试验、间接免疫荧光试验和Weston blot试验,结果表明:GSH-Au NCs具有选择性抗PRRSV的作用,而对PRV无明显影响。最后以GSH-Au NCs为荧光探针通过激光共聚焦扫描显微镜观察PRV入侵PK-15细胞的过程,观察到PRV侵入PK-15细胞12 h后在细胞核发现明显的绿色荧光,说明PRV在复制后期会明显的破坏PK-15细胞的细胞核。这将为AuNCs应用于抗病毒领域提供一定的借鉴意义。2.以牛血清白蛋白(BSA)为修饰剂合成水溶性的荧光BSA-Au NCs和Au-Ag NCs,并对合成的AuNCs进行FL、UV、DLS和FT-IR的表征,用MTT法评估了BSA-Au NCs和Au-Ag NCs在PK-15细胞的细胞毒性,结果表明:BSA-Au NCs和Au-Ag NCs具有良好的光稳定性,当两种Au NCs的浓度小于600 μmol/L时,PK-15细胞的存活率在80%以上。将BSA-Au NCs和Au-Ag NCs用于PK-15细胞成像研究,发现这两种Au NCs在PK-15细胞中观察不到明显的荧光。最后,探究这两种Au NCs对于PRV入侵PK-15细胞的影响,发现BSA-Au NCs和Au-Ag NCs对于PRV入侵PK-15细胞无明显的影响。这一研究结果有望将AuNCs进一步应用于病毒的标记研究。
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