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[目的]败血症休克情况下主要表现为体循环压力的下降和早期肺循环压力的升高,甚至肺动脉高压(pulmonary artery hypertension, PAH)。本实验旨在探讨高浓度的LPS是否导致肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cell, PASMC)本身收缩能力的变化。[方法]通过急性消化酶分离法获得单个PASMC,在200倍倒置显微镜下,灌流含10μg/ml LPS的生理盐溶液,通过细胞长度的变化、完成收缩所需时间的变化观察LPS对PASMC的直接刺激作用。对LPS预处理的PASMC,分别给予80mM高钾溶液、苯肾上腺素及内皮素-1(endothelin-1, ET-1),观察LPS对PASMC的收缩能力的影响。[结果](1)本实验采取的急性消化酶法获得的PASMC存活率>95%,PASMC纯度达97.7±1.78%。(2)10μg/ml的LPS不能直接引起PASMC收缩反应。(3)80mM的高钾等渗溶液可引起PASMC收缩,经10μg/ml LPS预处理10min,PASMC对80mM高钾等渗HBSS溶液的反应更敏感,表现为高钾刺激后2.5min(68.43±1.46 vs47.70±5.70,P<0.001)、5min(75.42±0.87 vs 63.45±3.65,P<0.01)、10min(80.23±0.57 vs 74.01±2.17,P<0.05)时点收缩幅度较对照组明显增大。LPS预处理的PASMC完成50%(1.03±0.10 vs 2.38±0.36,P<0.01)及90%(4.04±0.31 vs7.14±0.75,P<0.001)总收缩长度所用时间较对照组显著缩短。(4)10μM及lmM的苯肾上腺素均不能引起PASMC收缩；LPS预处理后,10μM的苯肾上腺素也不能引起PASMC收缩。(5)10nM的ET-1作用于PASMC,约lmin左右,PASMC发生迅速而强烈的收缩。经10μg/ml LPS预处理10min,PASMC对10nM的ET-1的收缩反应没有明显的增强或抑制作用(P>0.05)。[结论]10μg/ml的LPS不能直接引起PASMC收缩,经LPS预处理后对80mMK诱发的收缩反应表现为增敏作用,而对ET-1诱发的收缩反应无明显影响。[目的]旨在探讨LPS对肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cell, PASMC)内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响及其与钙库操纵性钙通道(SOC)的活性和表达的关系。[方法]经典瞬时受体电位通道(transient receptor potential canonical, TRPC)被证实是SOC的主要分子基础,通过Real-time PCR检测正常及LPS刺激后SD大鼠肺动脉平滑肌上TRPC1、3、4、5、6 mRNA的表达。通过钙离子荧光探针及共聚焦显微镜技术观察LPS对血管收缩剂引起的PASMC细胞内[Ca2+]i变化、钙释放(calcium release)和钙内流(calcium entry)的影响。通过非选择性SOC阻滞剂SKF-96365、选择性SOC阻滞剂2-APB、电压操纵性钙通道阻滞剂硝苯地平和ET-1的受体阻滞剂BQ-123,观察SOC引起的钙内流在PASMC兴奋活动中的地位。[结果](1)TRPC1、3、4、5、6在肺动脉、颈动脉和尾动脉上均有表达,相互之间无显著性差异,P>0.05。10μg/ml LPS孵育10min后,肺动脉上TRPC1(1.21E-05±0.01E-05 vs 3.82E-05±0.46E-05, P<0.001)、TRPC3(1.34E-05±0.17E-05 vs 6.29E-05±0.15E-05, P<0.001)、TRPC4(1.36E-05±0.15E-05 vs 7.46E-05±0.11E-05, P<0.001)的表达显著性升高。(2)10μg/ml LPS刺激后,肺动脉上ETA-R(1.31E-05±0.23E-05 vs 5.26E-05±0.15E-05, P<0.01)、ETB-R(1.44E-05±0.10E-05 vs 3.43E-05±0.20E-05, P<0.001)的mRNA的表达明显升高；而α1-肾上腺素受体mRNA的表达显著降低(3.16E-05±0.10E-05 vs 0.72E-05±0.29E-05,P<0.001)。(3)10μg/ml LPS预处理PASMC10min后,细胞内[Ca2+]i无可检测性变化(0.01±0.01 vs 0.01±0.02,P>0.05),80mM高钾溶液(0.95±0.06 vs 1.25±0.10,P<0.05)及10nM的ET-1(1.56±0.07 vs 1.98±0.09,P<0.05)引起的PASMC细胞内[Ca2+]i增幅均较对照组明显增高。(4)10μg/ml LPS预处理的PASMC钙释放较对照组降低(1.36±0.07 vs1.66±0.06,P<0.01),而钙内流较对照组增多(1.32±0.10 vs 1.06±0.07,p<0.05)。(5)SOC通道依赖的钙内流在ET-1引起的PASMC激动作用占有重要作用,SOC通道的阻断剂SKF-96365和2-APB分别可阻断73.0%和70.8%的PASMC的激活作用。[结论]LPS预处理的PASMC细胞内[Ca2+]i无可检测性变化,但可使血管收缩剂引起的[Ca2+]i的增幅增大,[Ca2+]i增幅的增大主要来源于钙内流的增加。LPS可能通过上调SOC(即TRPC)通道的表达以及增敏SOC的活性改变PASMC的收缩能力。