研究背景及目的作为全球最常见的癌症之一,结直肠癌（CRC）对人类健康构成了严重威胁,因此对其发病机制的认识显得尤为重要。PTEN,是继P53之后发现的又一重要抑癌基因,主要作为脂质磷酸酶拮抗PI3K-AKT信号通路发挥肿瘤抑制活性。研究揭示,越来越多的蛋白被发现能够与PTEN发生相互作用。PTEN主要通过与结合蛋白的相互作用来调控其自身活性,进而影响肿瘤进展。那么除了已知的结合蛋白之外,PTEN是否通过与其他蛋白的相互作用来参与调控结直肠癌进展呢?在此,我们的研究发现转录因子FOXK1是PTEN的新的结合蛋白。在结直肠癌中,PTEN通过并依赖于与FOXK1的相互作用来促进FOXK1的泛素化降解,进而负调控其蛋白水平。此外,我们还通过转录组测序找到了可能受PTEN-FOXK1调控的下游靶基因AP1。综上所述,我们的研究丰富了PTEN在结直肠癌中的机制研究,并且提示PTEN-FOXK1轴可能作为临床上治疗结直肠癌的潜在靶点。方法1.通过免疫共沉淀实验捕获PTEN的结合蛋白,再通过质谱分析对这些蛋白进行鉴定,从而找到可能与PTEN发生相互作用的潜在结合蛋白。2.通过免疫共沉淀实验结合GST-pull down实验验证潜在结合蛋白FOXK1与PTEN之间是否存在相互作用。3.通过分子克隆构建PTEN结构域分别缺失的截短突变体并转染细胞使其外源过表达,然后进行免疫共沉淀实验,从而明确PTEN结合FOXK1的具体结构域。4.将细胞进行核质分离后,分别进行免疫共沉淀实验,明确FOXK1与PTEN发生相互作用的场所是胞核还是胞质。5.通过QRT-PCR、WB实验检测PTEN与FOXK1之间是否存在调控关系。并通过CHX半衰期实验、MG132回复实验、泛素化实验分析PTEN负调控FOXK1蛋白水平的机制。6.通过转录组测序找到可能受PTEN-FOXK1调控的下游靶基因。结果1、FOXK1是PTEN的新的结合蛋白。2、PTEN负调控FOXK1的蛋白水平。3、PTEN促进FOXK1的泛素化降解。4、PTEN调控FOXK1蛋白水平依赖于它们之间的相互作用。5、AP1可能是受PTEN-FOXK1调控的下游靶基因。结论PTEN通过与FOXK1的相互作用来促进FOXK1的泛素化降解,进而负调控癌基因FOXK1的蛋白水平。PTEN-FOXK1轴可能作为临床上治疗结直肠癌的潜在靶点。