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目的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎症为主要表现的自身免疫性疾病。成纤维样滑膜细胞是滑膜组织的重要组成部分,其分泌高水平促炎性细胞因子、化学趋化因子、基质蛋白降解酶等,持续刺激滑膜细胞,作用于滑膜信号转导途径的不同部位,引起细胞内蛋白激酶的持续激活,从而导致滑膜信号转导异常以及滑膜细胞的增殖与凋亡失衡,引起关节的炎症和破坏。TNF-α具有多种生物活性,是一种重要的生理炎性介质,主要由单核巨噬细胞产生,通过作用于靶细胞上的独特受体结合而发生作用。TNF-α是RA发病机理中居于重要地位的促炎症细胞因子,参与RA的发生发展过程,能够刺激滑膜成纤维细胞增生及分泌IL-6、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、趋化因子以及基质金属蛋白酶和前列腺素等效应分子。因此,针对TNF-α在类风湿关节炎中所起的重要作用,已有TNF-α拮抗剂批准上市治疗类风湿关节炎。但长期使用TNF-α阻断剂易产生抗体及引起感染。八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)是神经肽,具有抗炎、免疫调节作用。已有研究证实CCK-8在TNF-α存在的情况下可以抑制胶原性关节炎滑膜细胞增殖,但对于RA的滑膜细胞是否具有同样作用至今尚未见报道。为了进一步研究CCK-8对治疗RA的潜在应用价值,我们观察了不同浓度的CCK-8对TNF-α诱导的类风湿关节炎滑膜细胞增殖的影响。方法1、类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的原代培养：在无菌条件下取得新鲜的RA滑膜组织,胶原酶消化法分离纯化滑膜成纤维细胞,实验用3-7代细胞。2、免疫组化鉴定所培养的细胞为成纤维样滑膜细胞。3、细胞生长抑制实验(MTT)观察不同浓度的CCK-8对经过TNF-α作用的滑膜细胞增殖的影响。4、细胞凋亡实验观察滑膜细胞凋亡情况。结果1、不同浓度的CCK-8对TNF-α诱导的RAFLS增殖的影响不同浓度的CCK-8预孵1小时RAFLS,再加入TNF-α作用48小时后,MTT实验结果显示,在TNF-α(10ng/ml)存在的情况下,CCK-8浓度为10-6mol／L时,A值为0.286±0.0185,CCK-8浓度为10-7mol／L时,A值为0.375±0.0342,CCK-8浓度为10-6mol／L时,A值为0.372±0.034。当CCK-8浓度为10-6mol／L时A值与对照组TNF-α(10ng/ml) A值相比差异显著(P<0.01),与其他浓度的CCK-8组相比差异亦显著(P<0.01)。CCK-8浓度为10-5mol／L、10-7mol／L时A值与空白对照组A值无明显差异(P>0.05),但与TNF-α组相比差异显著(P<0.01)。CCK-8对TNF-α引起的RA FLS增殖的抑制作用,与其剂量无明显的正相关效应,在CCK-8浓度为10-6mol／L时此种抑制作用最明显。2、细胞凋亡实验结果CCK-8(10-6mol／L)预孵1小时RA FLS,再加入TNF-α作用18小时后,细胞凋亡试验结果显示凋亡率为61.62%；单独CCK-8作用的FLS,细胞凋亡试验结果显示其凋亡率为59.59%；单独TNF-α(10ng/ml)作用的FLS,其凋亡率为52.47%。结果显示在TNF-α存在的情况下,CCK-8可以促进RAFLS凋亡,此外可以拮抗TNF-α对RAFLS的抗凋亡作用。结论1、CCK-8可以抑制TNF-α引起的RA FLS增殖。在CCK-8浓度为10-6mol／L时,抑制作用最明显,但这种抑制作用与CCK-8的浓度无明显正相关性。2、在TNF-α存在的情况下,CCK-8可以促进RA FLS的凋亡。CCK-8有拮抗TNF-α抑制RA FLS凋亡的作用。3、进一步验证了TNF-α可以诱导类风湿关节炎滑膜细胞的增殖,抑制其凋亡。