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卵黄积累是甲壳类卵母细胞发育成熟的必要前提。卵黄蛋白原（Vg）在卵黄发生期迅速积累，为甲壳动物的胚胎和早期幼体的发育提供营养。目前，关于在虾类卵巢发育的整个过程中，卵黄蛋白原mRNA表达量的变化的研究报道相对较少。在日本囊对虾卵黄蛋白原的研究中，虽然已确定了卵巢和肝胰腺是卵黄蛋白原的合成部位，但是，在卵巢发育的整个过程中，卵黄蛋白原mRNA的变化规律尚不清楚。而克氏原螯虾卵黄蛋白原表达的相关研究较少，Vg的合成部位及表达量的变化状况均未报道。为研究日本囊对虾和克氏原螯虾Vg的合成规律，本实验首先参照甲壳动物卵黄发生规律，以卵巢的颜色、形态及组织切片观察到的占主要比例的卵细胞的时相和进行统计分析的细胞直径大小为依据，将日本囊对虾和克氏原螯虾的卵巢发育分为卵原细胞增殖期、卵黄发生前期、初级卵黄发生期、次级卵黄发生期、成熟期、恢复期六个时期，并比较了以卵巢形态特征为依据与以组织切片观察为依据的发育阶段的划分之间的区别。分别利用半定量RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR分析日本囊对虾和克氏原螯虾卵巢发育不同时期卵巢和肝胰腺中Vg-mRNA的表达情况。运用Bio-Rad Quantity One软件分析半定量PCR的凝胶电泳结果，发现：日本囊对虾卵巢和肝胰腺都存在Vg-mRNA的表达；在卵巢中，随着卵巢的发育，Vg-mRNA的相对表达量不断增加，恢复期时急剧减少；在肝胰腺中，随着卵巢发育，相对表达量同样呈增加趋势，恢复期急剧减少。卵巢和肝胰腺中Vg-mRNA的相对表达量呈相同趋势：均随着卵巢的发育逐渐增多，在次级卵黄发生期和成熟期时达到峰值，恢复期时急剧降低。进一步运用SYBR Green I荧光定量PCR检测，日本囊对虾Vg-mRNA荧光定量PCR分析结果表明：在卵巢内，Vg-mRNA的相对表达量随着卵巢发育不断增加，分别为1.0，1.7，16.3，45.6，而在成熟期时为24.8，恢复期降至9.9；在肝胰腺中，卵巢发育的六个时期的相对表达量分别为1.8，4.6，16.0，3.8，7.9，和1.5。再结合卵巢发育不同时期卵巢和肝胰腺的组织质量，计算卵巢和肝胰腺的组织相对表达总量和贡献率，发现处于次级卵黄发生期和成熟期的卵巢的相对表达总量，占卵巢发育过程中整个相对表达总量的70%以上，肝胰腺的总贡献率只占20%左右，从这些结果可以得出卵巢是日本囊对虾卵黄蛋白原表达的主要器官。同时，Northern杂交结果显示，卵巢和肝胰腺在8.0kb左右的位置都有杂交信号的出现。尤其在次级卵黄发生期和成熟期的卵巢和肝胰腺中都检测到了比较强烈的杂交信号，并且杂交信号有随着卵巢的发育不断增强的趋势。综合以上结果可以得出：在日本囊对虾卵巢发育过程中，卵巢和肝胰腺中都有Vg-mRNA的表达，说明二者都是其合成部位；从卵巢和肝胰腺中Vg-mRNA的相对表达总量和贡献率来看，卵巢在卵黄蛋白原的合成过程中的占主导地位。对于克氏原螯虾，半定量RT-PCR分析结果表明：随着卵巢的发育，在卵巢中Vg产物的电泳条带亮度一直增大，到成熟期时达到最大值465.5，恢复期迅速变暗，灰度值为29.7；肝胰腺中Vg-mRNA半定量RT-PCR扩增结果在卵原细胞增殖期、卵黄发生前期、初级卵黄发生期条带亮度变化不明显，到次级卵黄发生期亮度最亮，其灰度值为817.8，而后恢复期则变暗，相应的灰度值为132.7.半定量RT-PCR结果显示Vg-mRNA相对表达量在卵巢和肝胰腺中都是随着卵巢的发育，表达量在逐渐增多，分别在成熟期和次级卵黄发生期时达到最大，恢复期迅速下降。实时荧光定量RT-PCR分析结果显示卵巢中卵黄蛋白原mRNA的表达量随着卵巢的发育，在前四个时期，虽一直在增加，但增加不明显，到成熟期时增加到最大值为37.6；成熟期卵巢的相对表达量与其他时期相比，存在着显著差异（P<0.05）；在肝胰腺中，卵黄蛋白原mRNA的相对表达量也随着卵巢的发育逐渐增多，次级卵黄发生期时迅速增加，相对表达量为817.2，在成熟期时达到最大值，为2315.4，次级卵黄发生期和成熟期的相对表达量与其他几个时期相比，存在显著差异（P<0.05）。根据克氏原螯虾卵黄蛋白原mRNA在卵巢发育不同时期的相对表达量，结合组织处于该时期的组织质量，计算卵巢和肝胰腺的相对表达总量，结果显示：卵巢的总相对表达量要远远小于肝胰腺的总相对表达量，特别是处于卵巢成熟期时肝胰腺的相对表达总量，远远大于其他时期，占总相对表达量的80%以上。根据卵巢发育不同时期，卵巢和肝胰腺的相对表达总量，计算在卵黄蛋白原合成过程中，卵巢和肝胰腺的贡献率，发现卵巢虽然具备合成卵黄蛋白原的功能，但其贡献率几乎可以忽略不计，肝胰腺的贡献对卵黄的积累来说则是至关重要的。Northern杂交实验发现在卵巢中没有观察到杂交信号，而在初级卵黄发生期的肝胰腺中观察到显著地杂交信号，杂交信号的位置在8kb左右的位置。比较日本囊对虾和克氏原螯虾卵黄蛋白原mRNA表达状况发现，日本囊对虾的卵巢的贡献率占80%以上，而克氏原螯虾肝胰腺的总表达量占99%以上，推测日本囊对虾的卵黄蛋白原主要由卵巢合成，克氏原螯虾的卵黄蛋白原则主要由肝胰腺合成，二者之间存在差异。卵黄蛋白原mRNA的表达水平与变化规律在这两种虾类之间的差异，对这两种动物卵巢发育到底有何影响，还需要进一步的研究证实。