研究背景及目的:肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是指原发于肝细胞的癌症,简称肝癌.肝癌自1982年开始取代胃癌成为第二位癌症.近十多年来肝癌的临床研究已取得了很大的进展,但肝癌五年生存率仍较低,只有33﹪.由此可见,单靠临床研究来提高肝癌病人的生存率是不够的,应同时大力加强肝癌的病因发病学研究,包括肝癌相关基因的研究,这对于阐明肝癌的发病机理以及开发出新的诊断和治疗手段都具有重要意义.如果能够找出在肝癌发生发展中起关键作用的相关基因,根据其在肝癌中的作用和变化可开发出新的分子诊断、基因治疗和预后评估以及设计出新的药物治疗等方法,可望提高肝癌病人的生存率.近年来对肝癌的比较基因组杂交研究显示,肝癌中1q、8q、6p、17q、20q和11q均有不同程度的基因扩增,其中以1q和8q的扩增最为显著.1q的扩增在肝癌是一个常发事件,扩增率可高达56-78﹪,而且经常可以看到1q区带的高频扩增,最小高频扩增区域之一已被定位于1q21-22.上述研究结果表明,在1q21-22上很可能存在至少一个在肝癌发生起作用的癌基因.RIT1基因定位于1q21.3,研究表明,RIT1可能在调节其特有的信号传导通路中起重要作用,其遗传学改变可能导致NIH3T3细胞的恶性转化和增殖.PDZK1基因定位于1q21.1,Xu等用基因芯片的研究显示PDZK1基因在肝癌的表达水平上调,且用半定量RT-PCR的方法验证了这一结论.Kocher等的研究显示PDZK1与CMOAT和MAP17相互作用在多药耐药的细胞机制中发挥着重要作用,提示PDZK1可能是癌细胞抵抗化疗的靶点.基因扩增在实体肿瘤的癌变过程中起着重要的作用,是原癌基因活化的主要方式之一.我们根据既往的研究选取RIT1和PDZK1为候选癌基因,研究其基因扩增的情况并与临床资料相联系,这样可为定位1q21-22上的癌基因提供依据,并可以了解RIT1和PDZK1基因在肝癌发生、发展中所起的作用.结论:4.1利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是一种定量准确、重现性好的检验基因拷贝数的方法;4.2基因扩增是RIT1和PDZK1基因在肝细胞癌中的一种主要激活方式;4.3RIT1基因扩增与患者生存、病理分级及肝硬化程度密切相关,提示该基因可能是肝细胞癌相关的候选癌基因;4.4RIT1基因的扩增与患者的生存和病理分级密切相关,提示该基因的扩增情况可能为临床提供预后和肿瘤恶性程度的参考指标.