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目的：
肝癌作为世界最常见恶性肿瘤之一，在我国的恶性肿瘤死亡率中居第二位。尽管对于肝癌的早期诊断、手术以及非手术治疗水平已经取得明显进步，但是疗效都不理想，病人预后较差。因此迫切需要找到新的治疗方法。随着分子生物学的发展和对肿瘤发生分子机制认识的深入，人们发现，基因治疗能够为肿瘤的综合治疗提供有益的借鉴与帮助。
越来越多的研究发现，信号转导与转录激活因子3(signaltransducerandactivatoroftranscription3，STAT3)在多种恶性肿瘤中持续活化，使细胞内信号的过度放大，将导致细胞的异常增殖和凋亡障碍，促进肿瘤的形成、发展。鉴于此，我们以肝癌细胞系HepG2、H7402、PLC/PRF/5为研究对象、STAT3为作用靶点，研究转录因子诱骗(transcriptionfactordecoy)技术对肝癌细胞生物学特征的影响，分析其干扰STAT3功能的作用机制，并通过体外实验初步评价运用诱骗寡聚核苷酸(decoy-ODN)技术干扰STAT3信号通路作为肝癌治疗靶点的可行性。
方法：
1.WesternBlot技术检测肝癌细胞系HepG2、H7402、PLC/PRF/5的STAT3总蛋白表达/活化水平。
2.用脂质体介导的方法将ODN转染入肝癌细胞系HepG2、H7402、PLC/PRF/5，流式细胞术检测FITC标记的STAT3decoy-ODN的转染效果。
3.应用荧光素酶报告基因分析STAT3decoy-ODN与STAT3结合能力。
4.3H与细胞计数法分析HepG2、H7402、PLC/PRF/5细胞增殖能力。
5.流式细胞术分析转染STAT3decoy-ODN后HepG2、H7402、PLC/PRF/5细胞周期。
6.流式细胞术检测细胞凋亡。
7.RT-PCR方法检测STAT3decoy-ODN对细胞周期和凋亡相关基因mRNA表达水平的影响。
8.WesternBlot方法分析STAT3decoy-ODN对细胞周期和凋亡相关基因蛋白表达水平的影响。
结果：
1.WesternBlot分析发现，在肝癌细胞系HepG2、H7402、PLC/PRF/5中STAT3与Phospho-STAT3(Try-705、Ser-727)表达水平较高。
2.流式细胞术检测发现，STAT3decoy-ODN能高效转染肝癌细胞系HepG2、H7402、PLC/PRF/5，并且转染效率与STAT3decoy-ODN的浓度成正比。
3.应用荧光素酶报告基因分析发现，STAT3decoy-ODN能有效阻断HepG2、H7402、PLC/PRF/5细胞中STAT3的转录活性。
4.3H和细胞计数实验均证实decoy-ODN对HepG2、H7402、PLC/PRF/5细胞的生长呈时间和浓度依赖性抑制。
5.流式细胞术检测显示，STAT3decoy-ODN转染HepG2、H7402、PLC/PRF/5细胞后，G0/G1期细胞比率明显上升，而S期比率明显降低。
6.流式细胞术检测发现，STAT3decoy-ODN转染可以使HepG2、H7402、PLC/PRF/5细胞凋亡明显增加。
7.STAT3decoyODN转染细胞后，RT-PCR证实bcl-x1，c-myc，cyclinD1mRNA表达水平显著降低。
8.WesternBlot分析显示，STAT3decoyODN转染细胞使细胞周期和凋亡相关基因(bcl-x1，cyclinD1)蛋白表达水平显著降低。
以上各试验同时设同浓度scranble-ODN组、空白细胞组作对照，发现scranble-ODN组对肝癌细胞系的增殖及STAT3下游基因的表达无明显抑制作用，对细胞周期亦无明显影响。
结论：
本研究以肝癌细胞系HepG2、H7402、PLC/PRF/5作为研究对象，采用STAT3诱骗寡聚核苷酸(decoy-ODN)技术，特异性阻断过度活化的STAT3。通过对体外肝癌细胞检测的增殖以及其他分子机制的研究，评价该技术对人类肝癌的治疗作用。在实验中我们发现，STAT3decoy-ODN通过增加G0/G1期细胞数并使S期细胞数减少，从而显著抑制肝癌细胞的增殖。进一步的研究证实，该技术还能使STAT3调控的细胞凋亡和细胞周期相关基因均在转录与翻译水平被明显下调。从而说明过度活化的STAT3参与了肝癌的发生发展过程，STAT3是一个治疗肝癌的潜在分子靶点，STAT3decoy-ODN有望用于肝癌基因治疗。