噬菌体JS25的分离鉴定、批量纯化及在牛奶中抑菌效果研究

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牛奶作为人们生活的营养品,其质量安全关乎人群健康。奶牛乳房炎的多发,致使原料奶中常受到病原菌的污染。金黄色葡萄球菌是引发奶牛乳房炎的重要病原菌,利用抗生素杀菌会导致奶中药物残留和耐药菌产生,寻找新的控制牛奶中病原菌污染的方法成为当务之急。噬菌体作为食品中潜在的杀菌剂已成为研究的热点。本研究在江苏奶牛场分离得到一株金黄色葡萄球菌裂解性噬菌体JS25,对其生物学特性、体外杀菌效果、批量富集和纯化技术及其在牛奶中的抑菌效果开展了研究。具体内容如下:1.噬菌体JS25的分离鉴定:以金黄色葡萄球菌ATCC6538为宿主菌分离获得一株裂解性强的噬菌体,命名为vB_SauM_JS25,简称JS25。该噬菌体鉴定为双链DNA,属于尾病毒目肌尾噬菌体科。潜伏期为10min,爆发期为60min,平均爆发量为21。吸附时间与吸附率分别是5min和92%。温度在37~50℃和pH在6~9间较为稳定。该噬菌体估算约含有15种结构蛋白,JS25的基因组大小约为128kb。该噬菌体有较宽的宿主谱。2.噬菌体JS25的富集条件优化:从培养温度、培养时间、孵育时间和MOI四个因素进行切入,测定培养后的噬菌体效价。当培养温度为37℃,培养时间为6h,孵育时间为5min, MOI为100时,噬菌体进行富集后得到子代噬菌体数量最大。3.噬菌体JS25纯化条件优化:实验分别比较了聚乙二醇(PEG)浓缩纯化、超速离心浓缩纯化和过滤法对噬菌体的纯化效果,通过测定噬菌体效价、蛋白质去除率和肠毒素去除率来得到最优纯化方法。得出结论:PEG6000优化效果优于PEG8000,超速离心法优于PEG6000浓缩纯化,即混合液过滤后,35000xg,超离1.5h,效果达到最佳。4.噬菌体JS25在牛奶中的抑菌效果测定:研究不同效价的噬菌体与培养温度对不同浓度全脂牛奶与脱脂牛奶中细菌的抑菌效果。同时设立无菌水空白对照。结果表明:噬菌体JS25在牛奶中具有抑菌的效果,通过提高噬菌体的效价或者在低温储藏的牛奶中抑菌效果更好。
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