红锥(Castanopsis hystrix A.DC.),属壳斗科常绿乔木,具有生长快、材质优、适应广等优良特性。本实验目的是通过ISSR分子标记、过氧化物和酯酶同工酶、rbcL基因序列差异比对,从不同角度探讨10个优质红锥品系的遗传多样性,并且结合重要生理指标进行综合分析。主要实验结果如下:(1)通过ISSR对10个优质红锥品系亲缘关系分析:实验确定红锥ISSR-PCR最佳扩增条件为20 ul反应体系中:模板60 ng,1 U Taq酶,1.5 mmol/LMg2+,dNTP0.25 mmol/L,引物0.5μmol/L,2%甲酰胺。PCR扩增条件:94℃预变性5 min, 94℃变性30 S,52～55℃复性45s,72℃延伸2 min, 40个循环,72℃延伸7 min。利用STATIS统计软件的欧氏可变类平均法构建类型之间的分子系统树,聚类分析可将10个优质红锥品系分为四类。(2)同工酶分析:过氧化物同工酶:电泳结果表明红锥过氧化物同工酶可在三个位置显带,并集中分布于两个区域(A、B),其中A区可认为是红锥的特征谱带,浦北具有B区的特殊条带,可以将其与其它红锥品系区分开来。酯酶分析:酯酶谱带的分布据Rm的大小分为A、B、C、D三个区段。即,A区: 0.38～0.44;B区:0.49;C区:0.57;D区:0.81～0.92。A区靠近负极,所带负电荷较弱,电泳速度慢,共有2条谱带,Rm呈现逐渐增大规律,为红锥的特征谱带。B区较A区靠近正极,电泳速度较快,共有1条谱带,为广东2号、凭祥、博白共有。C区电泳速度较快,共1条谱带,为博白、苍梧共有。D区电泳速率最快,共3条谱带,其中浦北占有三条谱带,可以看作是其特有带型,博白占有其中一条。(3)rbcL基因序列比对分析:通过PCR扩增得到10个红锥品系的rbcL基因全序列,均为1.513 kb,序列比对表明从256 bp～1455 bp10个红锥品系之间16处碱基发生变异,变异率为1%,其中306 bp处和634 bp处10个红锥品系较对照同属的castanopsis lucida发生相同的变异,可以看作属内进化信息碱基。ISSR聚类的第一类群中的广东1号、容县、凭祥、东兰较castanopsis lucida rbcl序列均发生碱基变异,并且容县和凭祥在426 bp处发生相同变异,第四类群浦北在3处碱基位置较其它9个品系发生变异,其它第二、第三的3个品系较castanopsis lucida没有发生变异,可以推论