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本论文工作涉及用不同的荧光染料标记NPY,合成已知的、对相应受体具有高亲和性的活性"建筑块",用购买的不同荧光染料和合成的荧光吲哚喹嗪衍生物对这些活性建筑块进行标记,测定这些荧光标记物的生物活性以及建立生物测试方法.所合成的荧光探针的基本结构有:荧光NPY、精氨酸型荧光Y<,1>受体拮抗剂、与CGP71683类似的荧光Y<,5>受体拮抗剂以及与美吡胺和aminopotentidine类似的组胺H<,1>和H<,2>受体荧光拮抗剂.作为放射性配体的可替换形式,荧光配体在受体研究中的最大障碍是由于自发荧光造成的低信噪比,尤其当被研究的受体存在于自然环境中时,例如用G蛋白受体偶联的细胞膜或全细胞进行研究时就是这样.本论文选择NPY作为模型配体并用不同发射光波长的染料如羧基荧光素、四甲基罗丹明、BODIPY、丹酰、NBD-X和花青5(Cy5)进行了标记.这些荧光NPY衍生物的NPYY<,1>受体活性表明所有连接于pNPY分子4-位赖氨酸氨基上的荧光色团都使NPY对Y<,1>受体的活性降低.荧光部分体积越大,活性降低越多.用Ca<2+>测定法测得部分荧光配体的活性与Y<,1>受体结合试验测得的K<,i>相吻合,受体活性与NPY相比最大降低10倍.用吖啶-9-甲酰基代替BIBP 3226分子中的二苯基乙酰基得到3209,其Y<,1>受体拮抗活性比BIBP3226低100倍.此外,在BIBP 3226的N-端引入极性的NBD基团造成活性的大大降低,这与增加BIBP 3226中二芳基部分的疏水性使其活性增加的结论一致.在3206中精氨酰胺与荧光色团的连接方式与在BIBP3226中与二芳基的连接完全不同.CGP71683A中α-萘磺酰基的5-位氢原子被二甲基氨基取代得到荧光化合物3311,这一分子结构的较小变化使3311的Y<,5>受体拮抗活性较CGP71683A降低约17倍.α-萘磺酰基被吖啶-9-甲酰基取代得到3313,其活性与CGP71683A相比降低了约70倍.在分子中引入更极性的基团NBD得到化合物3312,其活性与CGP71683A相比降低了约200倍.这些数据支持了Rueeger的结论,即α-萘磺酰胺基团对CGP71683A的Y<,5>受体亲和性是很重要的,该基团可能通过疏水相互作用与Y<,5>受体结合.本论文中合成了与组胺H<,1>受体拮抗剂美吡胺和组胺H<,2>受体拮抗剂amino-potentidine结构类似的伯胺并与不同的荧光色团偶联,例如与羧基荧光素,羧基萘并荧光素,四甲基罗丹明,羧基罗丹明,BODIPY,丹酰染料或硝基苯并(口恶)二唑染料(NBD)偶联.用体外方法测定了这些荧光化合物的组胺H<,1>拮抗作用和组胺H<,2>拮抗作用.H<,1>拮抗作用:在组胺H<,1>荧光拮抗剂中,用羧基荧光素、NBD-X和NBD标记的产物(3414d,3415d,3420和3422)拮抗活性最高,pA<,2>值在8.3-9范围.H<,2>拮抗作用:在组胺H<,1>荧光拮抗剂中,虽然大多化合物活性一般,但是用NBD标记的化合物活性较高,与市售法莫替丁活性相当.该研究项目选用NPY受体亚型为模型,用标记于4-位赖氨酸的Cy5-NPY进行竞争结合研究,选用的受体亚型为表达Y<,1>(HEL细胞)、Y<,2>(SMS-KANN细胞)或Y<,5>受体的(Y<,5>-转染的HEC-1B细胞)细胞.测定选定的细胞群得到竞争曲线,并由此算出K<,i>值.用这一方法对其它选择的NPY(Y<,1>,Y<,5>)拮抗剂进行测定,所得的K<,i>值与放射性结合试验结果很好吻合.