TGFβ1在低氧诱导肺血管内皮向平滑肌样细胞转分化中的作用

被引量 : 0次 | 上传用户:y5603179
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的研究低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAEC)向平滑肌样细胞的转分化及转化生长因子β1(TGFβ1)在此转分化过程中的作用。方法1.胰酶消化法获取猪肺动脉内皮细胞,并用免疫磁珠法(以PECAM-1/CD31阳性表达作为分选标记)对原代肺动脉内皮细胞进行纯化;2.形态学观察结合免疫组化检测Ⅷ因子和CD31对内皮细胞进行鉴定;3.实验分组:将纯化后的PAEC分成四组:(1)常氧组(N)(含21%O2,5%CO2和74%N2);(2)低氧组(H)(含1%O2,5%CO2,94%N2);(3)常氧+TGFβ1抑制组(N+TGFβ1 Neutralizing Abs);(4)低氧+TGFβ1抑制组(H+TGFβ1 Neutralizing Abs)。各组分别培养1、4、7天;4.平滑肌样细胞的鉴定:形态学观察结合免疫组化检测平滑肌标志性蛋白α-SM- actin,判定有无平滑肌样细胞的转分化;5.用逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测常氧和低氧组细胞TGFβ-1mRNA.;6.免疫印迹(Western-blot)检测常氧和低氧组细胞TGFβ-1蛋白的表达。结果1.免疫磁珠纯化可剔除内皮细胞中的杂细胞,获得高纯度的内皮细胞。纯化后的内皮细胞相差显微镜下观察呈典型的铺路石样外观,免疫组化检测Ⅷ因子(FⅧ)和CD31呈阳性表达。2.平滑肌样细胞的鉴定:形态学观察转化细胞呈梭形,免疫组化检测α-SM- actin呈阳性表达。3.各组细胞转化率比较:第1天各组均未出现平滑肌样细胞的转化(图7、8);第4天和7天N组未出现转化细胞,H组出现转化细胞,且第7天H组转化率明显高于第4天H组转化率(P < 0.05);阻断TGFβ1的作用后,第4天和第7天H+ TGFβ1 Neu Abs组的转化率分别低于其对应的H组(P < 0.05),其余各组均未见转化细胞。4.低氧可增加肺动脉内皮细胞TGFβ1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论1.磁珠分选法是一种有效的细胞纯化方法,可高效快捷的分离纯化出高纯度的血管内皮细胞。2.肺动脉内皮细胞中存在具有转分化为平滑肌样细胞潜能的细胞;3.低氧可明显促进内皮-平滑肌转分化;4. TGFβ1在此转分化过程中起促进作用。
其他文献
我国拥有漫长的海岸线,海域面积辽阔。随着我国经济发展水平的提高和继续增长的需求,沿海地区有大量的海洋工程需要建设。在施工前,为确保工程安全,必须查明地下地质情况,因
中国新文学初期是“人的觉醒”的时代,也是现代文体自觉的时期,文体大解放是新文化运动的辉煌成果。“五四”文学革命是应思想解放的迫切要求而发生的,以形式方面的变革为开端,为
零库存是一种物流、生产、库存和计划管理的现代方法,是当今时代库存管理的理想状态。实现零库存是企业追求的目标,是企业优异管理能力的体现。本文从零库存实际运用出发,探
<正>新修订后的《环境保护法》(以下简称新《环保法》)已审议通过。环境保护部副部长潘岳表示,新《环保法》加重了行政监管部门的责任,一方面授予对各级政府、环保部门许多新
淋病(gonorrhea)是由淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)引起的经典性病,1879年由德国人Neisser首次发现。人类是淋病奈瑟菌唯一的自然宿主,主要通过性接触而传播。淋病奈瑟
轨道车辆车体构件具有形状复杂、结构尺寸大、精度高、表面质量要求严格等特点,其成形与模具设计是制约我国模具工业特别是轨道车辆行业发展的关键性技术,高效、高质量和低成
文章旨在进一步发掘传统数字化资源建设优化提升的潜力, 为未来的发展寻找创新动力, 在大量国内外积累的经验和数据报告的基础上, 通过凝练经验, 提出基于创新性思维的解决方
文章分析了多媒体技术在初中数学教学中的优势,提出了多媒体技术在初中数学教学中的应用,包括营造轻松愉悦的教学氛围,创设形象化的教学情境,利用多媒体技术,突破教学重难点
<正> 一延安,是我国革命的圣地。在抗日战争和解放战争的漫长岁月里,曾经是党中央的所在地。伟大领袖毛主席、党中央就是在这里领导着全国人民进行艰苦卓绝的斗争,取得了打败
随着科学技术的快速发展,铝基复合材料(Al MMCs)以其高的比强度、比刚度、比模量、优异的耐磨性能,良好的耐高温性能以及在性能和加工方面较强的可设计性等特点,在航天、航空、